使用Trichoderma SPP抑制牛油果果皮果实腐烂。在肯尼亚的中央高地

摘要

对有机牛油果的需求，加上全球市场严格的食品安全标准，使得生产者采用替代的、安全的、对消费者友好的策略来控制牛油果采后真菌病。这项研究评估了体外功效trichoderma.SPP。（青霉，青霉，曲霉，和t . harzianum)防治鳄梨茎端腐病(SER)Lasiodiplodia theobromae，Neofusicccum parvum，nectria pseudotrichia，和Fusarium solani.)，采用双重培养技术。的trichoderma.SPP。也被单独在采后评估“Hass”鳄梨果实。孢子悬浮液在5×10^4.分生孢子的/毫升trichoderma.SPP。在真菌病原体（预胶质诱导前的三个时间点（预胶）之前的三个时间点施用在鳄梨果实上，与真菌病原体（同时接种）相同，并且在真菌病原体（发布）后24小时。在里面体外学习，T. Atroviridide.显示出最高的菌丝生长抑制作用联合国以及（48％），n pseudotrichia（55％），和F. Solani.(32.95%),T.．Harzianum.有最高的菌丝生长抑制作用L. Theobromae.．Trichoderma asperellum.抑制所有病原体的菌丝生长是最不有效的。相似地，T.．液对显示这最高的菌丝生长抑制作用n pseudotrichia抑制45%。在Postharvest“Hass”水果上，T. Atroviridide.表现出最高的抗N.Parvum，N.Pseudotrichia，和F. Solani.在所有应用程序中。木霉属液对和t . harzianum在接种后对所有病原菌都最有效，而Lasiodiplodia theobromae.最好的控制是t .液对那t . harzianum和t . asperellum在发布期间．两个都T. Atroviridide.和t . harzianum潜在的替代促进鳄梨果实的采后杀菌剂的潜在替代品，以及在待验证其疗效的现场条件下进一步测试。使用的可能性trichoderma.在商业水平上，也应探索对牛油果SER的管理。

1.介绍

鳄梨(佩戴尔亚洲人是世界上最重要的亚热带水果作物之一，也是肯尼亚的主要外汇来源[1那2］．2017年，从肯尼亚出口了300公吨的鳄梨水果，为GDP贡献了5050万美元[3.］．在全球范围内，鳄梨果实在各种农业生态区培养，以为国内和商业目的都是[4.］．由于存在单不饱和脂肪酸，几种矿物质（钾，铁和磷）和维生素（E，B和C），以及脂质和植物化学，因此果实在全球范围内得到了高营养价值。此外，鳄梨果实的消费与改善的整体饮食质量有关[2那5.］．

茎端腐烂（SER）疾病导致世界各种鳄梨生长地区的鳄梨果实损失。该疾病在营销，储存甚至过境到市场时会影响水果[6.］．Botryosphaeriaceae家族的成员（Diplodia mutila那D.伪核苷酸那d . seriata；Dothiorella iberica；Lasiodiplodia theobromae.；和Neofusicccum autharale那N.非贵妇人,联合国以及)主要与鳄梨果实的SER有关。据报道导致这种疾病的其他病原体包括Collettrichum gleooosporioides或C。果馅饼和Diaporthe Foenculacea Phomopsis Perseae那假毛癣菌，芳香多癣菌那Pestalotiopsis versicolor那Rhizopus Stolonifer.那Fusarium sambucinum，和Fusarium solani.[6.-9.］．在以前的研究中[10]，L. Theobromae，N.Parvum，N.Pseudothrichia和F. Solani病原鉴定为肯尼亚牛油果SER的主要原因。

多年来，合成化学品已成功用于控制植物疾病，他们有一个有前途的未来。但是，在水果和土壤上产生的化学残留物，非耐脱毒素，化学品的高成本继续存在显着关注[11］．此外，消费者越来越需要降低生产化学品的使用。此外，食品安全标准和有机食品消费组织需要生产最低可检测的残留物[12］．利用微生物杀菌剂，微生物拮抗剂和生物防治剂（酵母，细菌和拮抗性真菌）在果实采后疾病的管理中提供了合成杀菌剂的潜在替代方法[13］．生物控制方法涉及使用微生物减少或保持采后真菌病原体低于经济损失[14］．

目前，水果的几种果实可以通过天然微生物拮抗剂或人工引入的微生物拮抗剂来控制[15］．微生物拮抗剂比合成杀菌剂有几个优点。它们对环境友好，使用更安全，无毒残留物，生产经济[16］．trichoderma.Spp.已广泛应用于采后贮藏，以保护重要的商业水果和蔬菜，如辣椒、芒果、苹果、香蕉、草莓和番茄[17那18］．绿色木霉，哈茨木霉，和t . koningii表现出对抗活性L. Theobromae.和Collettrichum Musae.导致香蕉采后室温贮藏和冷藏后冠腐病复合体[19］．木霉属harzianum还据报道，在香蕉中控制炭疽病，保持采后果实质量，减少自然水果感染[20.］．

对鳄梨果实采后疾病的生物控制取得了实质性进展[16那21］．然而，没有尝试在肯尼亚鳄梨果实采后疾病的生物控制。因此，该研究研究了所选的拮抗活动trichoderma.SPP。针对肯尼亚中央高地鳄梨果实的牛油果果实相关的真菌病原体。

2。材料和方法

2.1。孤立的来源

“Hass”鳄梨果实的样本是从肯尼亚中央高地Murang'a县的果园和当地市场获得的。将果实在室温（22°C-25°C）在肯尼亚农业和畜牧研究组织（Kalro），Kandara，培养7-14天，以允许开发茎端腐败疾病。用干净的自来水清洁显示出茎端腐蚀症状的水果，通过浸入75％乙醇3分钟，并在蒸馏水中漂洗。来自腐烂的边缘的小块腐烂组织无菌分离，接种在马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）上，并在室温（22-25℃）下温育5天。通过传递菌丝体的悬垂尖端来获得纯培养物。基于形态学和文化特征鉴定分离株，并通过分子鉴定证实。倾斜通用瓶用于将PDA的纯培养物在4℃下储存。本研究使用了四种常见的病原体。

2．2．敌人的来源

两种商品品种．（t . asperellum和t . harzianum）和两个本地获取的SPP。（T. Atroviridide.和t .液对）的trichoderma.在本研究中使用。木霉属harzianum从生物杀菌剂TRIANUM P (t . harzianumRifai菌株T22, 1 × 10^9.从Koppert生物系统中形成菌落形成单位（CFU）/克干重。Trichoderma asperellum.从生物杀菌剂MAZAO SUSTAIN (TRC900 1.7 × 10^9. cfu/gram of dry weight) from real IPM.木霉属atroviride（克里）和t .液对(BMLT54P1)来自肯雅塔大学农业科技系。用无菌蒸馏水浸渍14天的纯培养物制备孢子悬液。用无菌丝环刮去孢子，使其悬浮。再用双层薄棉布过滤，收集的滤液依次稀释至1 × 10^5.．用血球计调整孢子浓度。

2．3．对抗性的活动trichoderma.SPP。针对牛油果水果干液腐伤病原体体外

2.3.1。双重文化分析

四个抑制活性trichoderma.SPP。，青霉，青霉，曲霉，和t . harzianum，针对四种Ser Fungal病原体，Lasiodiplodia theobromae，Neofusicccum parvum，nectria pseudotrichia，和Fusarium solani.，使用双重培养技术确定[8.］．将无菌PDA倒入直径9厘米的培养皿中。从积极生长7天历史的真菌菌落的边缘置于培养皿的一侧的边缘的菌丝盘（直径5mm）。一种直径5毫米的菌丝盘从积极的生长trichoderma.菌种培养置于培养皿的相对边缘。在培养皿的一侧接种直径为5 mm的菌丝盘作为对照。每次处理重复6次，培养皿在25±2℃孵育。记录了试验病原菌和拮抗菌的菌丝生长情况。按照Rajendiran等人的公式计算抑制率[22]：其中C-菌丝病原体的生长在双培养板中的病原体的控制和T-菌丝体生长。

2.3.2。效果trichoderma.对鳄梨采后果实茎端腐病菌的防治

成熟的“哈斯”鳄梨果实收获了穆朗安县的农场。没有明显症状或疾病的症状，没有物理损害的果实。用行驶自来水洗涤水果并通过将它们浸渍在75％乙醇中3分钟的表面灭菌。然后用蒸馏水冲洗水果并置于灭菌的托盘上，在室温下风干燥。

能力trichoderma.物种抑制SER的发展“哈斯鳄梨果实测试通过添加的每一个对手在三个时间点:(i)前24小时内真菌病原体(preinoculation),(2)同时真菌病原体(并发接种),和(3)后24小时内真菌病原体(postinoculation) [8.］．

在“哈斯”牛油果的茎端单独喷洒50个μ.l孢子悬架（5×10^5.分生孢子/ml)L. Theobromae，N.Parvum，N.Pseudotrichia，和F. Solani.）。还使用类似的拮抗剂，并且每种处理被复制四次。根据上述时间表在水果上施加病原体和拮抗剂。用每种病原体接种的果实并将其复制四次作为控制。实验进行了两次。

接种后的牛油果放入密封塑料容器(每个水果单独容器)，温度为25±2℃，孵育。12天后，通过纵向切割果实进行评价。采用0 ~ 5级的分类量表评价鳄梨果实SER发育的严重程度;表格1．


鳄梨果实上的％腐烂	年级

没有腐烂	0.
0-10％	1
11 - 25%	2
26-50％	3.
51-75％	4.
≥76％	5.

按照Lakshmi等人描述的下列公式计算疾病指数百分比[23]：

2.4。数据分析

在电子表格中记录和制表所获得的数据。之后，将数据导出到MIN选项卡17.0软件（Minitab，LLC）。生成描述性统计数据，其中数据被表示为平均值（SEM）的平均值±标准误差。使用单向分析（ANOVA）分析治疗组之间差异的统计学意义。Tukey的后HOC测试用于成对分离和手段的比较。测试了重要性的假设．

结果

3．1．抑制SER病原菌生长trichoderma.SPP。在双重文化中

所有的trichoderma.物种降低了四种菌丝体的生长（L. Theobromae，N.Parvum，N.Pseudotrichia，和F. Solani.）鳄梨Ser病原体。最高的菌丝体生长抑制L. Theobromae.由此产生t . harzianum（54.57％）随后T. Atroviridide.（36.28％）。Trichoderma asperellum.和t .液对被发现给予L的最低生长抑制（分别为29.88％和29.27％）．Theobromae.(表2）。木霉属atroviride有最高的菌丝生长抑制作用联合国以及（48％），n pseudotrichia（55％），和F. Solani.（32.95％）。木霉属atroviride 显着抑制了菌丝体的生长N.Parvum，N.Pseudotrichia，和F. Solani.与其他拮抗剂相比。Trichoderma asperellum.对所有病原菌(L. Theobromae.(29.88%),联合国以及（14.50％），n pseudotrichia（25％），和F. Solani.（14％）（表2））.木霉属液对抑制所有病原菌菌丝生长;然而，抑制作用最强的是n pseudotrichia抑制45%。


病原体	%菌丝生长抑制
病原体	t . asperellum	t . harzianum	T. Atroviridide.	t .液对

L. Theobromae.	29.88±3.94^B.	54.57±1.35.^一种	36.28±1.35.^B.	29.27±1.93^B.
联合国以及	14.50±2.22^C	37.50±2.50^B.	49.00±1.00^一种	35.50±1.26^B.
n pseudotrichia	25.00±0.58^C	42.50±2.50^B.	55.00±2.89^一种	45.00±3.79.^ab
F. Solani.	14.00±4.76^B.	15.40±1.78^B.	25.00±3.00^一种	21.00±1.00^ab

每组4个重复的数值用Mean±SEM表示。在一行内进行统计比较，相同字母的值通过单因素方差分析(one-way ANOVA)后跟Tukey的事后检验(post - hoc test)没有显著差异．

3．2.效果trichoderma.SPP。关于Postharvest“Hass”鳄梨水果的SER严重性

所有trichoderma.抑制了鳄梨果实SER的发育。水果处理t . asperellum在三种接种（预胶片，并发接种和发布）中仍然没有SER引起的F. Solani.．同样，SER的严重性由L. Theobromae.显着不同在三次测试中分别减少了高达10％，7.5％和5％。在三次接种中，t . asperellum减少鳄梨果实上的SER联合国以及高达30％，55％和40％。没有SER的发展n pseudotrichia同时接种t . asperellum；然而，在预诱导和开发期间，Ser严重程度分别降至20％和7.5（表3.）。


拮抗剂	疾病严重程度指数%
	病原体
	n pseudotrichia	联合国以及	L. Theobromae.	F. Solani.

Preinoculation
t . asperellum	20.00±20.0.^B.	30.00±10.00^B.	10.00±10.0^C	0.00±0.00.^B.
T. Atroviridide.	0.00±0.00.^C	5.00±5.00.^C	7.50±2.50^C	7.50±2.50^一种
t . harzianum	90.00±0.00^一种	30.00±15.0^B.	42.50±2.50^B.	0.00±0.00.^B.
t .液对	0.00±0.00.^C	35.00±35.0.^一种	70.00±0.00^一种	0.00±0.00.^B.

并发接种
t . asperellum	0.00±0.00.^一种	55.00±0.00^一种	7.50±7.50.^D.	0.00±0.00.^一种
T. Atroviridide.	0.00±0.00.^一种	0.00±0.00.^C	100.00±0.00.^一种	0.00±0.00.^一种
t . harzianum	90.00±0.00^一种	17.50±2.50^B.	42.50±2.50^C	0.00±0.00.^一种
t .液对	7.50±7.50.^B.	0.00±0.00.^C	70.00±0.00^B.	0.00±0.00.^一种

发布
t . asperellum	7.50±7.50.^一种	40.00±0.00.^一种	5.00±5.00.^一种	0.00±0.00.^一种
T. Atroviridide.	0.00±0.00.^B.	0.00±0.00.^B.	100.00±0.00.^B.	0.00±0.00.^一种
t . harzianum	0.00±0.00.^B.	0.00±0.00.^B.	0.00±0.00.^B.	0.00±0.00.^一种
t .液对	0.00±0.00.^B.	0.00±0.00.^B.	0.00±0.00.^B.	0.00±0.00.^一种
控制	90.00±0.00^一种	60.00±0.00.^一种	100.00±0.00.^一种	40.00±0.0.^B.

值表示为每组四种鳄梨果实的平均值±SEM。在各个列内的意味着不同的小写上标在显着不同．

所有的果实都仍然没有衬里N.Parvum，N.Pseudotrichia,F. Solani.在同时和发布的t . atroviride。木霉属atroviride没有抑制果实上SER的发育L. Theobromae.在并发和发布期间;然而那在预接种期间，果实保持自由的SER发育由于n pseudotrichia。同样地，由于的SER的严重程度可可虫，N. parvum，和F. Solani.在预处理期间分别降至5％，7.5％和7.5％T. Atroviridide.(表3.）．

在postinoculationt . harzianum，在鳄梨水果上没有开发的Ser。此外，在同时接种期间t . harzianum和N.Parvum，N.Pseudotrichia,F. Solani.，水果仍然没有SER．木霉属harzianum没有抑制鳄梨果实上SER的发育，因为L. Theobromae.在同时接种和n pseudotrichia在预存（表3.）．

所有的水果保持自由从SER木霉属液对接种后24小时真菌致病菌。同样地，在预接种期间，鳄梨果实仍然没有SER由于n pseudotrichia和F. Solani.，而在同时接种的同时，由于果实而没有SER开发联合国以及和F. Solani.．SER的严重程度L. Theobromae.预接种和与t .液对(表3.）．

木霉属atroviride最有效地控制SER的发展N.Parvum，N.Pseudotrichia,F. Solani.在所有治疗中，而且木霉属液对和t . harzianum接种后最有效(Table3.）．

4。讨论

能力t . harzianum能显著抑制菌丝的生长L.．Theobromae.本研究报告了Wijeratnam等人的研究。[24] 在哪里t . harzianum报告是否得到有效控制L. Theobromae.在斯里兰卡造成番木瓜和芒果的血清。同样，Bhadra等人。[25]报道了最大的抑制t . harzianum反对L. Theobromae.同时接种。而且，t . harzianum据报道，明显减少了戒指造成的茎端腐烂L. Theobromae.[26］．

在这项研究中，T. Atroviridide.是最有效的F. Solani.相比于曲霉霉，哈茨霉霉，和维特斯，Kumar等人的证实结果。[27谁报告了更高的疗效T. Atroviridide.反对F. Solani.相比t . harzianum．Rajendiran等。[22还报告了强烈的拮抗活动T. Atroviridide.反对Fusarium S.导致果实采后腐烂的物种。木霉属atroviride抑制了菌丝体的生长L. Theobromae.增长36.28％，虽然抑制低于t . harzianum（54.57％），和T.．阿托罗维西里亚啶已举报有效控制L. Theobromae.导致芒果的茎端腐烂[28］．木霉属液对抑制菌丝体的生长L. Theobromae.本森泰和阿蒂努瓦的确证报告[29] 在哪里t .液对菌株TvSUT10抑制菌丝生长L. Theobromae.导致木薯梭的53％。

Trichoderma asperellum.抑制了菌丝体的生长L. Theobromae.高达29.88％。Trichoderma asperellum.菌株NG-TI61以前的报道没有任何拮抗活性L.可可碱体外．但是，分枝瘤和培养滤液t . asperellum控制了由L. Theobromae.在香蕉水果上[30.纠正了这项研究的结果。

木霉属atroviride在控制中脱颖而出N.Parvum，N.Pseudotrichia和F. Solani，而t . harzianum在控制方面表现更好L. Theobromae.在此期间体外鳄梨果实的试验及采后处理。类似地，Borges等人进行的研究[31柚木溃疡病的生物防治L. Theobromae.显示了阳性相关性体内和体外研究。木霉属atroviride表现出更高的疗效t . harzianum反对L. Theobromae.那n .以及和n pseudotrichia在预存期间。在评价葡萄树修剪伤口保护的生物控制剂，Kotze等人。[32)报道,T. Atroviridide.更有效t . harzianum反对L. Theobromae.和联合国以及当它在病原体的施用之前施用了这项研究的结果。同样，Valenzuela等。[8.]报道了高疗效T. Atroviridide.反对c . gleosporiodes当它接种前24小时病原体。研究结果表明，该菌具有一定的生物活性T. Atroviridide.针对真菌病原体是保护的。

Trichoderma asperellum.表现出高效力L. Theobromae.在Postharvest鲕梨果实上。与预期的相反体外测试中,t . asperellum显示抑制率为29％。但是，这与Borges等人的报告相当。[28]在里面体内测试的t . asperellum反对L. Theobromae.导致柚木溃疡，在哪里t . asperellum显示完全控制L. Theobromae.．

当真菌病原体在拮抗剂之前24小时施用于Postharvest鲕梨果实时，曲霉霉，哈茨霉霉，和t .液对对四种病原菌引起的丝氨酸(SER)均有较好的抑制作用。同样的,T. Atroviridide.表现出完全的疗效N.Parvum，N.Parvum，N.Psudotrichia，和F. Solani.显示出…的能力trichoderma.以控制真菌病原体，即使它们已经在果实上生根。

5.结论

本研究的结果证明了这一点trichoderma.SPP。可以是可行的生物工具，可用于鳄梨果实系列疾病的管理，它们有可能取代合成杀菌剂。使用生物杀菌剂将促进鳄梨生产商生产高品质的鳄梨果实免受毒性残留物。但是，需要进行现场试验以验证验证的疗效trichoderma.SPP。以及在商业规模上使用物种的可能性。

数据可用性

用于支持本研究结果的数据包括在文章中。

利益冲突

提交人声明有关本文的出版物没有利益冲突。

致谢

这组作者感谢坎大拉的肯尼亚农业和牲畜研究组织(KALRO)的管理层，这项工作就是在那里开展的。这项研究是由作者的个人财务资助的。

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农业进展

抑制牛油果果实的茎末腐烂trichoderma.产于肯尼亚中部高地

摘要