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古生菌/2020/文章
特殊的问题

污染控制的生物过程:当前研究和新兴技术2020

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体积 2020 |文章的ID 8844811 | https://doi.org/10.1155/2020/8844811

Abirami Sasi, Nagarajan Duraipandiyan, Kannan Marikani, Sugapriya Dhanasekaran, Noura Al-Dayan, Divya Venugopal 一株新分离的产几丁质酶菌株的鉴定与特性研究地衣芽孢杆菌SSCL-10用于甲壳素降解",古生菌 卷。2020 文章的ID8844811 9 页面 2020 https://doi.org/10.1155/2020/8844811

一株新分离的产几丁质酶菌株的鉴定与特性研究地衣芽孢杆菌SSCL-10用于甲壳素降解

学术编辑器:于涛
收到了 2020年7月22日
修改后的 09九月2020
接受 10月15日
发表 2020年11月9日

摘要

几丁质酶或几丁质溶解酶在医学、农业和工业领域有不同的应用。本研究旨在开发一株高产高几丁质酶的新型突变株地衣芽孢杆菌.采用甲烷磺酸乙酯化学诱变和紫外线照射筛选潜在的几丁质溶解菌群。有16株突变株表现出几丁质酶活性。从几丁质酶产菌中筛选出几丁质酶活性最高的菌株,SDS-PAGE对其进行部分纯化,鉴定菌株为地衣芽孢杆菌(sclc -10),最高比活性为3.4 U/mL。诱变模型已成功应用于突变株EMS-13 (20.2 U/mL),几丁质酶产量提高了5-6倍,而突变株UV-11 (13.3 U/mL)的几丁质酶活性比野生株提高了3-4倍。部分纯化的几丁质酶分子量为66 kDa。野生株scl -10鉴定为地衣芽孢杆菌采用16S rRNA序列分析。本研究旨在探讨高几丁质酶产菌在甲壳类和虾类甲壳素废物回收和处理中的潜在应用,从而为甲壳类产业增加价值。

1.简介

据估计,2019年印度虾的产量为70万吨,泰米尔纳德邦是主要生产国之一。海产品行业为全球食品供应做出了重大贡献,提供了蛋白质的基本来源。这种水产养殖的商业化产生了经济利润,而这些工业产生的废物对生态系统产生了不利影响[12].据估计,全球鱼类产量将从2011年的1.54亿吨增至2030年的1.86亿吨[3.].大约5%的虾类废物被加工成面粉和提取物,作为动物饲料的基础[4].虾的排泄物含有40%的几丁质,这是一种由n -乙酰氨基葡萄糖单元组成的多糖[5]也是生物活性分子的重要主要来源[6].

甲壳素最常通过化学途径降解产生低聚糖。然而,这涉及到不良后果,如处理成本和使用强腐蚀性化学试剂对生态系统的有害影响[78].另一方面,生物技术途径是一种生态友好的途径[9]其中几丁质酶(糖基水解酶蛋白)在裂解蛋白质中起重要作用βn -乙酰氨基葡萄糖单元的-1,4键导致甲壳素降解[10].

大多数常见的细菌和真菌菌群合成几丁质分解酶,一些未知物种有效地分解这种几丁质聚合物。研究人员报告说,海洋环境是几丁质酶合成微生物的主要来源,其中大多数是细菌种类[11]其中只有4%的菌株被分类为[12].从海洋生态系统中鉴定为几丁质酶生产者的属包括芽孢杆菌气单胞菌属沙雷氏菌属肠杆菌属欧文氏菌色素细菌黄杆菌属节细菌属,弧菌13].其他几种已被研究用于生产几丁质分解酶的细菌是链球菌梭状芽胞杆菌,真细菌从鲸鱼粪便中分离出来的属[14];地衣芽孢杆菌从食品工业的废液中[15];链霉菌属而且沙雷氏菌属从甲壳类动物的残留物[16];而且芽孢杆菌amyloliquefaciens而且不动杆菌johnsonii从虾渣中[17].与陆地环境相比,几丁质酶生产者很少从水生生态系统中分离出来,因为它们是需氧的[12].筛选几丁质酶生产者已成为许多研究人员的一个重要领域,以帮助以经济可行和生态友好的方式降解虾残体。因此,本研究重点分离一株产几丁质酶菌株,并利用16S rRNA测序进行鉴定。研制了一株产高几丁质酶的突变株。

2.材料与方法

2.1.生物,培养基和培养条件

压力地衣芽孢杆菌(ssci -10)从印度Thoothukudi的海鲜工业废料(虾壳倾倒区)中分离出来,并在印度TN Virudhunagar的V.H.N.S.N (autonomous)微生物实验室中鉴定。培养条件、最佳温度、pH值和胶体几丁质浓度根据Abirami等早先的报道进行。[7].几丁质的分解和抗真菌特性已被鉴定和发表[718].

2.1.1.胶体几丁质和胶体几丁质琼脂(CCA)板的制备

胶体甲壳素根据[19].简单地说,5克几丁质粉(GRM1356-100G Hi-media,印度)缓慢加入60 L (10 N HCl)浓缩HCl,在4°C下持续搅拌过夜。将混合物加入500ml冰乙醇的50%,25°C,在旋转搅拌器中以200转/分钟的速度连续剧烈搅拌过夜。以10,000 rpm离心20分钟后,收集沉淀物,用无菌蒸馏水冲洗至中性(pH 7.0)。将收集的胶体甲壳素冷冻干燥,4°C保存至使用。胶体几丁质琼脂板是根据我们先前的报告制备的[7通过将5克胶体几丁质与矿物盐(KH2阿宝40.7 g, K2HPO40.3 g, MgSO4h·52O 0.5 g, FeSO4·7H2O 0.001 g, ZnSO40.001 g, MnCl20.001 g, 1 L琼脂20 g, pH为8)。

2.1.2.几丁质降解菌的初步筛选

初步筛选是用直径2 mm的牙签头将所有几丁质降解细菌分离株定点接种在CCA上,并在室温下培养。几丁质水解导致的清除区记录长达5天。筛选出单独产生5毫米以上洁净带的细菌分离株,进行二次筛选。

2.2.特异几丁质溶解活性的测定

几丁质酶活性测定采用Vyas和Deshpande方法[20.].简单地说,以胶体几丁质为底物测定几丁质酶活性。将酶溶液(0.5 mL)加入1.0 mL底物溶液(0.5 mL胶体几丁质悬浮在磷酸盐缓冲液(50 mM, pH 7.0)中),在37°C下孵育15分钟。离心后,用二硝基水杨酸法测定上清中还原糖含量,以n -乙酰氨基葡萄糖为标准[21].几丁质酶活性的一个单位被定义为释放1所需的酶的量μ摩尔n -乙酰- d -葡萄糖胺当量在50°C h-1

2.3.几丁质降解微生物对虾壳降解的测定

的生物降解潜力地衣芽孢杆菌(SSCL-10)在虾壳上测定。简单地说,被选中的地衣芽孢杆菌(SSCL-10)在含0.5%胶质几丁质营养肉汤中培养。50微升细菌接种量(0.5 OD)接种到1克虾壳中,在5 mL最小培养基(pH值7)中,40°C, 100 rpm旋转搅拌器中接种6天和12天。在孵育后,根据虾壳的降解效果,对虾壳进行降解地衣芽孢杆菌选择(SSCL-10)进行诱变,并在营养琼脂斜面上进行进一步研究。

2.4.分子鉴定与系统发育树构建
2.4.1.PCR扩增

分子鉴定采用16S rRNA分析。简而言之,几丁质酶产率高地衣芽孢杆菌(ssci -10)在我们早期的研究中报道[7]被选为研究对象。细菌基因组DNA地衣芽孢杆菌(ssci -10)采用Insta基因TM基质(Bio-Rad, cat-no。7326030),根据制造商的说明。然后,利用16S rRNA通用引物27F扩增16S rRNA亚单位基因片段(5 -AGAGTTTGATCMTGG CTCAG-3 反向引物1492R (5 -TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3 22使用MJ Research Peltier热循环仪(Marshall Scientific, USA)。PCR在30μL反应混合物(20ng基因组DNA),在以下循环条件下:95°C孵育2 min,然后95°C孵育1 min, 55°C孵育1 min, 72°C孵育1 min,循环35次,最后在72°C孵育10 min。

2.4.2.16S rRNA基因测序

PCR产物使用琼脂糖凝胶电泳检测,并使用Genei®凝胶提取试剂盒(Bangalore Genei, India)进行提取。在ABI3730xl DNA分析仪和BigDye Terminator循环测序试剂盒v.3.1 (Applied Biosystems, Carlsbad, CA, USA)的帮助下进行循环测序。引物518F -CCAGCAGCCGCGGTAATACG-3 (5 -TACCAGGGTATCTAATCC-3 用于测序反应。16S rRNA基因的短序列使用SeqMan (DNASTAR Inc.)编译。新生成的序列存入GenBank。

2.4.3.系统发育分析

为了分析几丁质酶生产者最接近的系统发育分类,测序的16S rRNA基因与BLAST (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)使用NCBI爆炸相似度搜索工具。我们的序列与爆炸结果密切相关的序列进行了系统发育分析,然后进行了多个序列比对。使用MUSCLE 3.7程序对序列进行多次比对[23].使用Gblocks 0.91b对对准序列进行固化,以消除对准不良的位置和发散区域(去除对准噪声)[24].最后,采用Phyml 3.0 aLRT程序进行系统发育分析,采用HKY85作为替代模型进行系统发育分析,结果表明,该替代模型的精度至少与现有系统发育程序相同,且数量级更快。树的绘制采用Tree Dyn 198.3程序[25].

2.5.紫外诱变地衣芽孢杆菌

紫外诱变方案参照Vaidya等[26作了修改。野生型的地衣芽孢杆菌(SSCL-10)接种于营养液中,37℃孵育24小时。一微升的培养物在黑暗条件下,以不同的时间间隔(0、2、4、6、8和10分钟)在开放的玻璃培养皿中,从60厘米的距离(Philips TUV 30 W, G3018,荷兰)暴露在短紫外光波长(280 nm)下,以防止光再活化。然后,在CCA板上连续稀释培养物,从低比例的紫外线幸存者中分离出突变菌株。通过观察高清除率区(CZ) /菌落大小(CS)比值和几丁质酶活性对突变体进行筛选和筛选。

2.6.化学诱变地衣芽孢杆菌

根据Vaidya等人的方法,用乙基甲烷磺酸钠(EMS)化学诱导突变。[26作了修改。对紫外突变菌株进行EMS化学突变,观察其对高几丁质酶产量的影响。的地衣芽孢杆菌(sclc -10) (UV-11)接种于营养液中,37℃孵育24小时。孵育后,从1ml培养基中收集颗粒,用无菌0.1 M Tris-HCl缓冲液(pH 7.5)洗涤两次,悬浮在等体积0.1 M Tris-HCl缓冲液(pH 7.5)中。收集颗粒并在0.1 M Tris-HCl缓冲液(pH 7.5)的一半体积中重新悬浮。细胞以0.1 mL的等份收集并保存在冰上。总共50个μ每根管中加入g/mL EMS,置于37°C的摇床水浴中30分钟。将细胞清洗并悬浮在0.1 M Tris-HCl缓冲液(pH 7.5)的1ml中,突变样品生长24 h。将诱导的突变体连续稀释并镀于CCA板上。通过观察高清除率区(CZ) /菌落大小(CS)比值和几丁质酶活性对突变体进行筛选和筛选。

2.7.高几丁质酶产生突变体的筛选与分离

在诱变过程后,将CCA板在室温下孵育,并检查长达5天的间隙区(几丁质水解)。测定了种群大小(CS)和间隙区(CZ),并测定了CZ/CS比值,并与野生型进行了比较。CZ/CS较高的菌落在几丁质琼脂斜面上传代培养,同时接种到含有1%胶体几丁质的100 mL营养肉汤中,在30°C的旋转振动筛上以100 rpm的速度培养48小时。收集培养滤液,测定几丁质酶活性。

2.8.几丁质酶的部分纯化

根据Akeed等人的方法,用65%饱和硫酸铵(SAS)沉淀法在4℃搅拌下从培养上清液(野生菌株、UV突变菌株和EMS突变菌株)中部分纯化粗酶。[27].沉淀通过在4°C下以11500 x g离心10分钟完成。沉淀物在等体积的醋酸钠缓冲液(pH 6)中重悬,并估计蛋白质浓度[28].几丁质酶活性最高的分离物经12%聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化,0.5%考马斯亮蓝R250 (Sigma)染色。蛋白质标记物也被电泳用于大小测定。

2.9.统计分析

进行方差分析(ANOVA),均数比较采用Tukey检验( 采用SPSS 18.0统计软件对其特异几丁质溶解活性进行了分析。

3.结果

3.1.野生型菌株的筛选

我们之前的研究报道了从虾残体中分离出的16个菌株表达了不同的水解晕大小(在胶体甲壳素琼脂培养基中清除区大于5毫米)[8].从这些分离物中,地衣芽孢杆菌(sclc -10)产生的几丁质酶活性最高,作为野生型(KCCD 201018),与突变型相比(图2)。S2).SSCL-10被列入Kamaraj学院文化保存库(KCCD 201018)的机构收藏。突变株UV-11和EMS-13的编码号分别为KCCD 201807和KCCD 201812。

菌株的菌落形态地衣芽孢杆菌(ssci -10)呈白色、圆形和凸形,边缘饱满,纹理光滑。镜下检查显示棒状,活动的营养细胞和内孢子形成,证实属于芽孢杆菌集团(无花果。S3).的地衣芽孢杆菌(scl -10)在培养第4天酶活性为3.4 U/mL(图1).基于我们之前的研究[8],在胶体几丁质最适浓度(1%)、温度40℃、pH 7的条件下,对野生菌株和突变菌株进行生长,产几丁质酶。

数字2通过视觉观察,揭示了虾壳在6天和12天后的生物降解情况。与6天相比,12天能有效降解虾壳外骨骼。

3.2.紫外诱变

地衣芽孢杆菌(SSCL-10)经紫外光诱变后,在CCA板上测定清除区(CZ)与菌落大小(CS)的比值。在不同的时间间隔内鉴定并分离出高几丁质酶产生菌株。在不同的时间间隔(0、2、4、6、8和10分钟),幸存者的百分比以剂量依赖的方式下降(图3(一个)).在胶体几丁质琼脂培养基中,对13个CZ/CS比值较高的突变体进行了几丁质酶生产的检测,其间隙范围为15 ~ 19 mm。发现突变UV-11产生13.3 U/mL(表2)1)的几丁质酶含量显著高于( 相比野生型(3.4 U/mL)1).


美国没有。 细菌的分离 CZ/CS(48小时后) 几丁质酶活性(单位/mL-1

1 野生型菌株 13 - 14日
2 UV突变体4 16 - 17
3. UV突变体7 16 - 17
4 UV突变体11 18日至19日
5 EMS突变体6 月22日至23日
6 EMS突变体9 月22日至23日
7 EMS突变体13 24 - 25日

3.3.EMS诱变

地衣芽孢杆菌(sclc -10)突变的UV-11进一步随EMS发生突变,幸存者的减少呈剂量依赖性(0-7μg)分光光度法测定(图3 (b)).研究人员对16个CZ/CS比值较高的突变体进行了几丁质酶生产的检测,这些突变体在胶体几丁质琼脂培养基中产生了19至27毫米的间隙区。突变体EMS 13产生的几丁质酶量最高,为20.2 U/mL(表13)1)的数字明显高于( 比野生型UV-11 (3.4 U/mL)和突变型UV-11 (13.3 U/mL)高(图2)1).测定了突变体EMS-13的高几丁质酶产量,发现在CCA斜体上连续传代6个月以上,高几丁质酶产量稳定。

3.4.几丁质溶解活性

数字1显示了三种重要的几丁质酶突变体的几丁质溶解活性分析( 与野生菌株相比,它们有不同的几丁质溶解能力。在特定活动的递增顺序中,野生动物地衣芽孢杆菌变异株(scl -10)产量最低,其次是UV-11,变异株EMS - 13产量最高。所选菌株的几丁质酶特异性活性在3.4 U/mL至20.4 U/mL之间(表2)1)(图。S4).此外,观察到的几丁质酶活性与各菌株中观察到的水解带形成之间存在很强的相关性。

3.5.系统发育分析

与数据库序列比较,SSCL-10分离物16S rRNA与数据库序列相似度为97%地衣芽孢杆菌记录在NCBI数据库(银行ID SUB2051105;基因库加入号KY063593;确定生物地衣芽孢杆菌)(表S1-S2).采用Tree Dyn 198.3程序绘制系统发育树(表2)S3).数字4的树渲染结果地衣芽孢杆菌(SSCL-10)。不同菌株16S rRNA序列的比对及系统发育分析芽孢杆菌菌株sclc -10的物种状态(图。S7),并确认分离菌株的分类和鉴定为地衣芽孢杆菌。

3.6.几丁质酶纯化

在4°C下,65%饱和硫酸铵(SAS)沉淀部分纯化几丁质酶(Chi-66)。变性部分纯化几丁质酶SDS-PAGE鉴定分子量接近66 kDa(图5).从各菌株装载总蛋白的等效量来看,野生型的沉淀呈细而小的条带;紫外突变株呈中等大小条带;EMS突变株呈粗条带,表明几丁质酶产量的增加程度(图。S5-S6).EMS突变株几丁质酶产酶量明显高于UV突变株和野生型。

4.讨论

几丁质酶最近被成功地分离和鉴定芽孢杆菌物种(29- - - - - -31].然而,生产高产几丁质酶是满足生态系统维持的基本需要的必要条件。本文报道了水稻高产野生品系的分离、分子鉴定及诱导诱变地衣芽孢杆菌具有几丁质溶解活性的虾废物。我们之前的研究报道了来自不同海洋来源的几丁质酶产酶分离株及其特性,以及最佳生长因子,如温度、pH、具有胶体几丁质浓度的培养基的营养成分、几丁质酶的产酶及其活性[7].几丁质溶解活性表明,存在一个清除区给予的分离株。早期研究表明,晕(清除区)的出现需要5至6天的长潜伏期[32].革兰氏阴性菌株在海洋环境中很常见,特别是在甲壳类动物和虾类废物中,它们可以引起海洋生物的疾病。我们早期的研究观察到几丁质酶由地衣芽孢杆菌(ssci -10)能有效降解蟑螂外骨骼[7].同样,目前的一项研究也证明了由地衣芽孢杆菌(ssci -10)能有效降解虾壳废弃物。我们的研究结果显示地衣芽孢杆菌(SSCL-10)是一种有潜力作为生物防治剂和改善生态环境的生物。

与革兰氏阳性细菌相比,海洋生态系统中90%的革兰氏阴性细菌多样性具有增强这些生物在极端温度下的生存能力、对营养缺乏的耐受性和快速适应能力以及高盐浓度[3334].UV-11和EMS-13突变株几丁质酶活性均高于此前报道[27]该菌株的最大比酶活性为14.2 U/mL地衣芽孢杆菌B307。另一方面,我们的野生品种地衣芽孢杆菌sclc -10的几丁质溶解活性值为3.4 U/mL,低于本研究比较的突变值和我们之前报道的突变值[7].戴等人。[35报告说芽孢杆菌Hu1粗提物几丁质酶活性为11.1 U/mgB地衣芽LHH100显示出Laribi-Habchi等人报道的494.5 U/mg蛋白的几丁质酶活性[15].

除了正常生产几丁质酶外,我们还设计了突变菌株,通过诱导UV和EMS突变来提高几丁质酶活性。这种方法在早期的研究中被应用产碱杆菌属xylosoxydans,可使几丁质酶的产量提高2-3倍[26].本研究首次报道了高几丁质酶活性地衣芽孢杆菌化学诱导(EMS)和紫外线辐射。此外,UV突变体地衣芽孢杆菌sclc -10 UV-11的几丁质酶产量比野生型提高3-4倍。此外,用EMS (EMS-13)诱变UV突变体(UV-11)可提高几丁质酶的产量,其比活性为20.4 U/mL。可见,紫外光诱变和化学诱变诱导野生型几丁质酶产量提高地衣芽孢杆菌ssci -10 5-6倍。另有报道称,几丁质酶的产量增加了两倍粘质沙雷氏菌qmb1466 [36]在假单胞菌stutzeriYPL-M26与n -甲基- n -硝基-n -亚硝基胍(NTG)诱变[37].部分纯化的几丁质酶被鉴定为66 kDa(图5)分子量蛋白SDS-PAGE测定。研究人员分离纯化了几丁质酶芽孢杆菌sp .范围为36、42、53、59、62、66、72、76和89 kDa [38- - - - - -40].几丁质酶已从分子量在相同范围内的其他微生物中分离出来。从中分离克隆了一个66 kDa的几丁质酶沙雷氏菌属proteamaculans41].另一项研究发现,四种分子质量分别为92,82,70和55kda的几丁质酶被分泌气单胞菌属caviaeCB101由单基因编码chi142].这些蛋白质是同一Chi1蛋白的不同截断,可能是由于翻译后形成几丁质酶过程的蛋白水解裂解。然而,这种处理的作用是不确定的。大多数研究的几丁质降解细菌具有多种几丁质酶,它们协同作用降解几丁质。从我们的研究中进一步阐明几丁质酶的结构将突出与其他几丁质酶的异同,并表明可能存在同一蛋白质的多个截断。我们先前的研究报告了分离的几丁质酶作为重要的生物防治剂对选定的植物真菌病原体,即。腐皮镰孢霉菌Rhizconia以上尖孢镰刀菌,曲霉属真菌spp。18].

地衣芽孢杆菌它是枯草属植物的一部分,常见于土壤和鸟类羽毛中。在鸟类中,它涉及羽毛降解和影响蜕皮和颜色模式。在人类中,这些物质通常会导致食物中毒,是乳制品、生牛奶、蔬菜、熟肉和加工过的婴儿食品的污染物。由于这种细菌产生和分泌水解酶,它有能力降解许多底物。这种可降解性的特性引起了人们对生物技术潜在应用的兴趣[1843].发酵后的鸟羽毛可以变成营养丰富的牲畜饲料。它还会产生碱性蛋白酶,用于洗衣液,因为它可以在较低的温度下去除衣服上的蛋白质污垢。因其具有抗真菌活性,故用作生物杀虫剂[1744].这有益生菌的潜力,当与B细小这能促进更好的免疫功能。B地衣芽甲壳素是甲壳类工业的主要废弃物之一,在甲壳素的生物转化中具有重要作用。几丁质是一种难以生物降解的环境问题,可以通过几丁质酶来缓解。几丁质酶负责将几丁质生物转化为n -乙酰氨基葡萄糖和壳寡糖等药理活性产物。这些衍生品最终可以为可持续的环境和进一步的下游应用做出贡献。的表征和排序地衣芽孢杆菌可以代表一种生物技术替代方法,以操纵海洋生态系统中能够分解几丁质的非致病性微生物,并用于可行的工业应用。

5.结论

鉴定并分离了几丁质溶解潜能地衣芽孢杆菌(SSCL-10)。我们的结果显示地衣芽孢杆菌(SSCL-10)是一种有潜力作为生物防治剂和改善生态环境的生物。对分离的野生菌株进行诱变,以提高几丁质酶的产量。细胞外几丁质酶得到部分纯化,纯化酶大小在66 kDa左右。突变株几丁质酶产量比野生株提高了6-7倍。对分离的野生几丁质酶生产者的16S rRNA进行测序,确定其属于该物种地衣芽孢杆菌,序列记录在NCBI数据库(Bank ID SUB2051105;基因库加入号KY063593;确定生物地衣芽孢杆菌).具有高几丁质溶解能力的菌株为突变株EMS-13,比活性为20.4 U/mL。ems诱导的突变株地衣芽孢杆菌sclc -10, EMS-13,被认为是产量最高的几丁质酶生产者,可以在生物控制,制药和生物技术领域找到潜在的应用(图。S1).此外,包括几丁质酶结构的分子分析在内的未来研究有助于与其他特征几丁质酶进行比较。这也将有助于进一步研究可用的甲壳素降解系统的可能性芽孢杆菌以及存在多种几丁质酶或同一蛋白质的截断形式。由于该酶具有较高的可降解性,其工业应用具有广阔的前景。高几丁质酶突变体可以在商业水平上研究几丁质废物的生物转化。此外,它对病原真菌的生物防治可用于重要商业作物的疾病防治,从而最大限度地减少农药的使用及其对作物和人类健康的负面影响。

数据可用性

本研究中使用的所有数据都可以作为本文的补充材料在网上找到。

附加分

高光。(1)分离到一株几丁质酶产生者,经16S rRNA基因测序鉴定为B地衣芽.(2) EMS和UV诱变诱导的高几丁质酶产量高于野生几丁质酶产量。(3)几丁质酶经部分纯化,鉴定为66 kDa蛋白。(4)本研究为高几丁质酶的生产提供了一种有效的工业级策略,可以对环境甲壳动物和虾残体中不可降解的几丁质废物进行生物处理。

利益冲突

作者声明没有利益冲突。

作者的贡献

AS、ND、KM和SD负责研究的概念和设计、数据采集和监督。NAD、DV和AS进行文献检索。AS、KM、ND对稿件进行了批判性审阅。AS、ND、SD、KM、DV、NAD对稿件进行了最终修改。

致谢

作者感谢科学研究院长萨塔姆·本·阿卜杜勒阿齐兹王子大学对这项工作的支持。作者对我们团队的及时协助表示衷心的感谢,SD也亲自感谢Muthamil Selvan先生的理解、全心全意的支持和鼓励。

补充材料

图1:从含有虾废弃物的土壤中分离并鉴定出几丁质水解产物。对分离的地衣芽孢杆菌(SSCL-10)进行了对虾降解性能和诱变试验。16S rRNA序列的分子分型揭示了地衣芽孢杆菌(scl -10)的系统发育谱系。利用紫外诱变野生株,选择高产几丁质酶产生剂(UV-11)进行EMS诱变,比较野生株和突变株几丁质酶产量。细胞外几丁质酶得到部分纯化,纯化酶的大小约为66 kDa。我们的结果表明,该生物作为生物防治剂的潜力,可以帮助改善生态环境。图2:几丁质胶体琼脂中几丁质酶降解菌的初步筛选与分离。图3:地衣芽孢杆菌scl -10的形态。图4:野生株和突变株几丁质酶活性。图5地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)产生的部分纯化几丁质酶(scl -10)的HPLC图。 Figure 6: partial purification of SDS-PAGE (original). Table 1: analysis report of B1 (B1_contig_1 report). Table 2: blast N report of B1. Table 3: parameters used for constructing the phylogenetic tree.补充材料

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