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国际肝病杂志

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国际肝病杂志/2020/文章

研究文章|开放获取

体积 2020 |文章的ID 5410359 | https://doi.org/10.1155/2020/5410359

Siufui Hendrawan, Jennifer Lheman, Nuraeni, Ursula Weber, Hans Ulrich Baer 聚l -乳酸基质肝细胞和胰岛细胞共移植治疗肝硬化",国际肝病杂志 卷。2020 文章的ID5410359 6 页面 2020 https://doi.org/10.1155/2020/5410359

聚l -乳酸基质肝细胞和胰岛细胞共移植治疗肝硬化

学术编辑器:德克Uhlmann
收到了 2020年4月7日
修改后的 9月26日2020
接受 10月7日2020
发表 10月14日

摘要

人自体肝细胞基质移植是一种很有前途的治疗肝损伤的替代方法。我们评估了从肝硬化肝脏中分离人肝细胞的结果与疾病严重程度的临床和组织学评分进行比较。肝细胞基质植入物临床I期研究共纳入了11例不同临床评分(CTP、MELD)和组织学评分(Metavir、纤维化)的肝硬化患者。采集患者肝脏段和胰腺组织,分离肝细胞和朗格汉斯胰岛细胞。新鲜分离的人肝细胞与胰岛细胞一起植入聚乳酸(PLLA)支架,培养后移植回患者体内。从11份肝硬化肝标本中分离出人肝细胞,产量为1.4±0.5 × 106每克肝脏标本细胞数为52±13%。结果发现,肝细胞的产量和活力与肝硬化的临床和组织学评分无相关性。在10个显微镜视野中发现,获得的肝细胞产量与平均肝细胞数之间存在相关性。在相同MELD评分范围内,与慢性丙型肝炎相比,从慢性乙型肝炎引起的肝硬化中获得了更多的活细胞。肝硬化的临床和组织学疾病严重程度评分与肝细胞分离结果无相关性。似乎产量可能取决于肝硬化组织下的肝炎类型。这项研究注册在www.clinicaltrial.gov研究标识符:NCT01335568

1.简介

很多患者死于不同原因的肝功能衰竭。尽管常规药物治疗可能有助于延缓疾病的进展或减轻症状,但它往往无法完全恢复受损组织的功能。因此,对许多患者来说,从合适的捐赠者那里移植健康的肝脏是唯一确定的治疗选择。然而,缺乏合适的器官捐赠者仍然是一个主要障碍。虽然十年来尸体供体器官的供应一直稳定,但对可移植肝脏的需求一直在逐步增加,超过了供体器官的供应[1].此外,器官移植项目在许多发展中国家可能无法实现。

在试图寻找肝硬化疾病的替代治疗方法时,发现了一种新的基于细胞的方法,即肝细胞移植[2].这一程序已成为重要的替代或支持治疗的正交各向异性肝移植(OLT)。这可能为器官短缺提供一个可能的解决方案。我们已经建立了体内自体肝细胞基质植入(HMI)作为肝硬化患者的一种可能的治疗方法,为这些患者提供了一种明确的治疗或桥接治疗(桥接移植)[3.].这种植入物可能有助于稳定和改善肝功能,直到有可供移植的器官。它也可以作为一种明确的治疗方法;HMI手术有一个很大的优势,因为它使用患者自己的肝组织作为细胞来源。由于肝细胞的自体性质,免疫抑制治疗是不必要的。

在这个过程中,胰细胞被同时播种以刺激肝细胞的生长。研究发现,与朗格汉斯胰岛细胞共培养可促进肝细胞的增殖和存活。特别是β细胞(产生胰岛素的细胞)被发现可以增加肝细胞的生长速度[4].因此,这些移植的肝细胞通过加入胰岛细胞共移植,可能有助于改善衰竭的肝脏功能。然而,考虑到从受损组织中分离和培养原代肝细胞的困难,这种细胞方法可能取决于细胞来源、细胞质量和活力。这项研究评估了预测肝硬化患者肝细胞分离结果(产量和活力)的因素。我们将患者进入研究前的临床疾病严重程度和肝硬化分级与从肝段获得的人肝细胞产量进行了比较。

2.方法

2.1.自体肝细胞基质移植(HMI)

I期研究的所有程序都按照当地研究伦理委员会批准的方案进行,伦理批准号为#REP2010_001。手术在印度尼西亚雅加达的Gading Pluit医院进行。肝组织取自完全同意接受HMI手术的各种终末期肝病患者。简而言之,该手术包括在第一次手术中获取患者自己的肝脏和胰腺组织。然后通过机械和酶的方法从这些组织中分离出朗格汉斯细胞的肝细胞和胰岛。细胞在可生物降解的PLLA支架上共培养和播种。在第二次手术中,这些工程细胞支架被植入患者的小肠肠系膜[3.].

2.2.PLLA支架制备

基质是一个三维(3D)多孔支架,包括聚(l-乳酸)(PLLA)聚合物。支架从法国Phrontier SARL公司获得,并使用等离子杀菌系统(Johnson & Johnson, USA)进行处理。它是一个三维圆形海绵,直径2厘米,厚度4毫米,孔隙率约90%。在使用之前,用取自小牛皮肤(Sigma,美国)的0.1% i型胶原蛋白溶液预涂消毒支架,以促进细胞播种和附着[5].

2.3.肝细胞隔离

从收获的11个肝硬化标本中分离出人肝细胞。一个 肝节段组织和a 胰腺组织被采集并立即放置在Custodiol®移植液和三袋无菌包装中,然后运送到雅加达Tarumanagara人类细胞技术(THCT)实验室,在2-3小时内进行处理。

使用改良的两阶段胶原酶灌注技术进行肝细胞分离[67].无菌检查后,称量并切开肝段以确定适合插管的血管。建立灌注回路,灌注管一端送入灌注液,导管中心段位于蠕动泵内(Ismatec MCP工艺IP65, Cole-Parmer,德国),导管另一端连接套管。随后,6根22号导管(B. Braun, Germany)被插入血管。灌注过程中,灌注液经无菌过滤器(0.22μM孔径)。灌注所用的所有溶液均在水浴中预热至37°C。首先用1 L乙二醇四乙酸洗涤缓冲液(EGTA, Sigma, USA)以20-60 rpm的流速灌注肝段,以冲洗任何剩余的血液。在此之后,用900 mL含胶原酶(Sigma,美国)和透明质酸酶(Sigma,美国)的酶溶液(5 U/mL)灌注该节段,以60 rpm的流速分离肝脏,直到肝脏块软化并颜色变浅。然后用组织切片机将肝段切成细片,浸泡在含有胶原酶和透明质酸酶的酶液(10 U/mL)中。在肝段机械分离后,悬浮液通过茶过滤器(0.8 mm目尺寸),然后是100个细胞筛μm目尺寸(Retsch,德国),无菌细胞刮板辅助。悬液在添加胎牛血清(FBS)的William E培养基(Sigma,美国)中以130 G洗涤三次10分钟。最后清洗后,将细胞球悬浮在添加10% v/v患者自体血清的William E培养基中。使用血细胞计,用台盼蓝(Sigma, USA)染料排除法测定细胞数量和活力。

2.4.胰腺单细胞分离

朗格汉斯岛细胞与肝细胞分离并行分离,如文献所述[7].将胰腺组织称量后用无菌手术刀在培养皿中切开,培养皿中加入10ml酶液(10u /mL)。然后分离的碎片在37°C和5% CO孵育215分钟。在潜伏期结束后,将悬浮液通过滤茶器。悬液用10-15 mL William E培养基(Sigma, USA)加FBS (Sigma, USA), 130 G洗涤10分钟,最后一个细胞球在加10% v/v自体血清的William E培养基中重悬。利用台盼蓝排除法对产量和生存力进行了评估。然后将胰腺细胞混悬液与肝细胞混悬液混合。

2.5.细胞在支架上的播种和培养

PLLA支架放置在12孔板中,并播种300μL细胞悬液(分离的肝细胞和胰岛细胞的混合物),平均密度为 每孔加入0.6-1 mL温培养基。工程细胞支架在37℃、5% CO条件下培养2过夜。第二天,将培养基更换为新鲜培养基;从培养基中收集未附着在基质上的细胞并计数。播种约63小时后,将支架及其粘附的细胞转移到新的12孔板中,填充0.3 mL预温的含10% v/v自体血清的William E培养基。收集前一个孔中剩余的细胞并进行计数。工程细胞支架在受监测的热箱(35-37°C)中运回医院,用于植入患者体内。

2.6.组织学形态学评价

在肝组织采集过程中额外采集的组织样本被保存用于组织学评估。标本切片用苏木精和伊红染色。使用Metavir评分系统通过对患者肝段的组织病理学评估来评估炎症和纤维化的程度。在10个随机显微镜视野中计算肝细胞数量。

2.7.数据分析与统计方法

结果表示为 使用Shapiro-Wilk检验评估数据的正态分布。变量之间的相关性由双尾皮尔逊检验确定,并认为值有统计学意义

3.结果

评估50例肝硬化患者,根据试验纳入标准,纳入11例,慢性乙型肝炎3例,慢性丙型肝炎7例,非病毒性慢性肝炎1例。在手术开始时,患者的child - turcote - pugh (CTP)评分在6 - 9之间,MELD评分在9 - 21之间。每个肝硬化标本的组织学评估显示,所有患者的Metavir活性等级在2到3之间,纤维化阶段为4期。纳入标准排除了活动性病毒性肝炎患者。我们纳入了病毒载量高达 还有三名肝炎患者病毒计数检测不到。对于乙型肝炎,我们可以依靠口服抗病毒药物。临床结果、实验室参数和病毒载量的影响已在我们的第一份出版物中报道。部分患者临床病情改善,住院次数减少,肝硬化并发症发生率降低[3.].10个视野内肝细胞的平均数量为 细胞(表1).


性别 研究开始时的年龄 诊断 病毒载量(IU/mL) 临床评分 组织学得分 10个视野内肝细胞的平均数量
CTP评分 MELD评分 Metavir

中位数(范围) 64%的米 58 (43 - 67) (9.5 - 8 (6 - 9) 15 (9) A3, f4 (a2-a3;F4) 40 (19 - 61)
病人 玫瑰(肝硬化)
1 58 消息灵通的。C 未被发现 8 15 A3, F4 61
2 52 消息灵通的。B 8 16 A2, F4 26
3. 56 消息灵通的。B 8 12 A3, F4 52
4 57 消息灵通的。C 未被发现 8 12 A2, F4 51
5 F 67 消息灵通的。C 6 10 A2, F4 59
6 43 消息灵通的。C 6 11 A2, F4 49
7 F 58 病毒的 厦门市 9 21 A3, F4 19
8 F 59 消息灵通的。C 6 9 A3, F4 33
9 F 60 消息灵通的。C 9 15 A3, F4 20.
10 59 消息灵通的。C 9 18 A3, F4 29
11 56 消息灵通的。B 8 16 A2, F4 40

Metavir评分:A:活动性、炎症;F:纤维化。

从11个肝硬化肝脏标本中处理并分离肝细胞,总细胞产量为 每个肝脏标本的细胞和平均存活率为 (表2).


病人 肝细胞隔离
组织重量(g) 细胞总产量 每克细胞产量 生存能力

1 11.8 24000000年 68%
2 32.4 38000000年 56%
3. 31.3 63800000年 62%
4 15.8 30000000年 62%
5 17.5 34000000年 66%
6 18.1 13000000年 34%
7 10.5 9600000年 40%
8 17.4 20000000年 40%
9 14.9 20000000年 33%
10 19.6 15000000年 50%
11 17.4 28000000年 60%

每克标本分离肝细胞的产量与临床和组织学疾病严重程度评分进行比较。平均肝细胞产量为 每克组织(表2).

统计分析每克肝组织肝细胞产率、临床和组织学评分与10个视野中肝细胞平均数量之间的相关性。肝细胞的产量和活力与肝硬化的临床和组织学评分无相关性。获得的肝细胞产量与患者的CTP评分、MELD评分、Metavir活性等级或肝硬化组织的纤维化阶段无显著相关性。细胞活力与这些分数之间也没有发现相关性。结果显示,唯一显著的相关性( 在10个视场中获得的细胞产量与正常肝细胞的平均数量之间。在相同MELD评分范围内,与慢性丙型肝炎相比,从慢性乙型肝炎引起的肝硬化中获得了更多的活细胞。

收获的胰腺组织样本也被处理以释放胰腺细胞。胰腺细胞的平均数量为 细胞的平均存活率为 定量后的细胞被植入到基质上。对于每个患者,大约生成并植入17个工程细胞支架。并非所有在矩阵上播种的细胞都附着在矩阵上。在多孔板的剩余悬浮液中发现了死亡细胞和一些不能粘附在基质上的活细胞。细胞在基质上的粘附率的平均值为

4.讨论

肝细胞移植是肝移植的潜在替代品或桥梁。近二十年来大量肝细胞移植的临床试验表明,由分离肝细胞组成的移植可以纠正肝硬化、急性肝衰竭和代谢性肝病等肝脏疾病,并在肝衰竭的情况下提供恢复潜力[8].虽然临床结果令人鼓舞,但肝细胞移植仍面临局限性,主要是供体肝细胞来源有限,缺乏持久效果。这些问题需要克服,以扩大其临床应用。迄今为止,肝细胞的功能可以通过与间充质干细胞(MSC)共培养来改善[9].此外,Yimlamai et al. [1011]在小鼠模型中发现了新的证据,表明“海马信号通路是细胞增殖和器官大小的重要调节因子。”他表明,通过这一信号通路,成熟的肝细胞可以被诱导恢复到干细胞样状态。Yimlamai报告说:“值得注意的是,体内Hippo通路信号的急性失活足以以非常高的效率将成年肝细胞去分化为含有祖细胞的细胞”[1011].

终末期肝病的肝细胞移植问题更大。将肝细胞移植至肝硬化的门静脉可引致严重的门脉高压症[12].门静脉输注通常使用大量肝细胞。然而,尽管它使用了大量的细胞,但确切的细胞数量移植并立即起作用以逆转肝衰竭仍然是未知的[13].在肝硬化患者中,肝外部位已被建议作为门静脉注射的替代方案,在这些患者中,改变原有的纤维化肝结构可能会影响肝细胞的植入[14].α -1抗胰蛋白酶可促进移植肝细胞的移植;然而,尚未在临床层面进行研究[15].

我们的HMI程序代表了一种有前途的方法,用于共培养人肝细胞与朗格汉斯岛细胞,并准备将其植入生物可降解聚合物基质到肠系膜叶。植入物的血管化对于有意义的组织功能至关重要。小肠的肠系膜已被发现提供了一个合适的植入位置,以建立血管化和整合[16].我们依靠Kneser的数据,他将肝细胞与胰岛细胞共移植到大鼠小肠肠系膜之间的支架上[17].我们推测,从胰腺和其他肠道器官流出的内脏血液可能会将重要的生长因子运输到这个地方支架上的细胞。通过这种方法,可以将足够的肝细胞团移植到患者自己的体内以支持肝功能,而且由于它是自体的,患者不会面临免疫排斥。这可以克服与门静脉输注、可移植细胞数量限制以及细胞存活和植入不足相关的技术问题[1819].我们的HMI临床一期研究主要是为了证明该手术的安全性。临床结果已在我们的第一份出版物中报道;大多数患者确实经历了病情的普遍改善[3.].

肝细胞移植的结果取决于移植细胞的质量和数量。原代肝细胞被用作肝细胞移植的细胞来源。许多已发表的研究报告了从正常肝组织中分离人肝细胞的成功结果[18].然而,肝硬化也可能是人类肝细胞的宝贵来源。在我们的研究中,我们从慢性肝炎引起的肝硬化患者的纤维化肝脏中分离出肝细胞。从病变肝组织中分离人肝细胞一直很困难,因为总体结果在细胞产量和活力方面变化很大[20.].我们建立了从肝硬化肝组织中分离人肝细胞的方法,细胞总数为 每个肝脏标本的细胞和平均存活率为 考虑到HMI程序的自体性质,每个患者分离的细胞数量有显著差异。收获的肝脏组织的物理状况也有所不同。Bhogal等人报道,胆汁性肝硬化患者的肝组织提供了55%的中位肝细胞活力;这与我们的结果一致[6].他们还报告说,影响成功的人肝细胞分离的最重要因素是肝脏切除和肝脏灌注开始之间的时间延迟。在我们的病例中,组织在切除后2-3小时内被新鲜处理,与Bhogal等报道的结果相比,细胞产量更高。[6].

我们发现患者在进入研究前的临床疾病严重程度(CTP和MELD)或肝硬化分级(Metavir)与从肝段获得的人肝细胞产量没有相关性。另一项研究表明,肝硬化对肝细胞的产量和活力没有任何影响;但由于他们只有4例肝硬化患者,结果无法得出结论[21].Richert等人报道,人肝细胞分离的成功不受患者年龄、性别、脂肪变性或胆汁淤积等术前因素的显著影响。组织收集和运输、肝活检重量、插管和分离程序方面的方案应优化每次肝段制备获得的活的人肝细胞的总产量[22].目前尚无比较人肝细胞分离结果和显微镜下肝细胞数量的研究。在我们的研究中,我们发现在显微镜视野中计数的肝细胞数量与从组织中分离出的肝细胞产量之间存在相关性。在显微镜视野下计数的正常肝细胞数量越多,获得的肝细胞产量越高。

我们期望体内自体肝细胞基质植入能够满足受体的代谢需求。新组织必须是活的,其功能必须满足相应移植适应症的定性和定量要求。必须保证生物人工肝组织的长期生存特性。先前的动物研究表明,当将肝细胞植入3D PLA支架并植入大鼠体内时,其完全存活和功能至少可维持6至12个月[1723].德国的第一个结果表明,十分之九的患者的肝功能和总体健康状况得到了显著改善[7].在德国,肝硬化通常是由酗酒引起的[24]与印度尼西亚的肝硬化不同,后者通常是由肝炎病毒引起的[25].乙型或丙型肝炎病毒会引起分散在整个器官的组织损伤。这可能解释了我们研究中获得的肝细胞的产量和活力低于德国研究的原因。肝硬化的阶段与肝细胞的产量和活力之间没有直接的相关性。另一方面,与MELD评分相同的慢性丙型肝炎患者相比,我们从慢性乙型肝炎患者中获得了更多的活细胞。HMI可作为肝硬化患者肝细胞移植的一种有价值的替代方法。我们现在正在对更多的患者进行II期研究,以证明这项研究的有效性。

5.结论

肝硬化阶段与肝细胞产量和活力无直接相关性。肝硬化的原因(肝炎的类型)可以改变孤立的肝细胞的产量和活力。

数据可用性

用于支持这项研究结果的数据包含在文章中。

信息披露

我们确认稿件已被所有指定作者阅读并批准,并且没有其他符合作者标准但未列出的人。我们进一步确认,手稿中列出的作者顺序已经得到我们所有人的认可。我们确认,我们已经充分考虑了与这项工作相关的知识产权保护,并且在知识产权方面不存在任何障碍,包括出版时间。在此过程中,我们确认我们遵守了我们机构有关知识产权的规定。

利益冲突

我们希望确认,这份出版物没有已知的利益冲突,这项工作也没有可能影响其结果的重大财政支持。

致谢

作者承认Gading Pluit私立医院,雅加达,印度尼西亚。我们要感谢Barlian Sutedja和Suryadi在这项研究中的支持与合作。这项实验室工作得到了苏黎世Baermed腹部外科中心的支持;细胞基质研究基金会,苏黎世,瑞士;雅加达Tarumanagara基金会和Tarumanagara大学;以及印度尼西亚雅加达的Gading Pluit医院。

参考文献

  1. S.-W。Lee, X. Wang, N. R. Chowdhury和J. Roy-Chowdhury,“肝细胞移植:技术现状和克服现有障碍的策略,”肝脏病学年鉴,第3卷,no。2,页48 - 53,2004。视图:出版商的网站|谷歌学者
  2. C. Di Campli, M. Nestola, A. C. Piscaglia等人,“肝脏疾病的细胞疗法”,《欧洲医学和药理学评论》,第7卷,no。2, pp. 41-44, 2003。视图:谷歌学者
  3. H. U. Baer, S. Hendrawan, T. Suryadi等人,“体内自体肝细胞基质植入治疗慢性肝病:一项改良临床一期研究”世界J外科外科杂志,第1067卷,no。1, 2018。视图:谷歌学者
  4. P. M. Kaufmann, U. Kneser, H. C. Fiegel等人,“在三维基质中,共移植的朗格汉斯胰岛是否有刺激肝细胞的最佳浓度?”移植,第68卷,no。2,页272-279,1999。视图:出版商的网站|谷歌学者
  5. K. Sugiyama, a . Okamura, N. Kawazoe, T. Tateishi, S. Sato,和G. Chen,“胶原蛋白在聚(l-乳酸)海绵表面的涂层用于组织工程,”材料科学与工程:C,第32卷,no。2,页290-295,2012。视图:出版商的网站|谷歌学者
  6. R. H. Bhogal, J. Hodson, D. C. Bartlett等人,“从正常和病变肝组织中分离人原代肝细胞:一百个肝脏经验”《公共科学图书馆•综合》,第6卷,no。3、第e18222条,2011。视图:出版商的网站|谷歌学者
  7. A. Schwarz, T. Lindl, C. Höhneke, M. Stange和W. Pieken,“人类自体肝细胞移植治疗肝硬化”,胃肠病学互联网杂志,第10卷,no。1, 2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
  8. R. Gramignoli, M. Vosough, K. Kannisto, R. C. Srinivasan和S. C. Strom,“临床肝细胞移植:实际限制和可能的解决方案。”欧洲外科研究,第54卷,no。3-4,页162 - 177,2015。视图:出版商的网站|谷歌学者
  9. E. Fitzpatrick, Y. Wu, P. Dhadda等人,“与间充质干细胞共培养可提高人肝细胞的活力和功能,”细胞移植,第24卷,no。1, pp. 73-83, 2015。视图:出版商的网站|谷歌学者
  10. D. Yimlamai, C. Christodoulou, G. G. Galli等人,“河马通路活性影响肝细胞命运”,细胞,第157卷,no。6, pp. 1324-1338, 2014。视图:出版商的网站|谷歌学者
  11. D. Yimlamai, B. H. Fowl和F. D. Camargo,“Hippo/YAP通路在肝脏生理学和癌症中的作用的新证据,”肝病杂志,第63卷,no。6, pp. 1491-1501, 2015。视图:出版商的网站|谷歌学者
  12. M. Mito和M. Kusano,“人类肝细胞移植”细胞移植,第2卷,no。1,页65-74,2017。视图:出版商的网站|谷歌学者
  13. K. A. Soltys, A. Soto-Gutiérrez, M. Nagaya等人,“肝细胞移植成功治疗肝病的障碍”,肝病杂志,第53卷,no。4, pp. 769-774, 2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
  14. S. Strom, J. Chowdhury和I. Fox,“用于治疗人类疾病的肝细胞移植”肝病研讨会,第19卷,no。1,页39-48,1999。视图:出版商的网站|谷歌学者
  15. C. Lee, A. Dhawan, C. Filippi等人,“使用α -1抗胰蛋白酶作为免疫调节剂提高肝细胞移植的疗效”肝病杂志2018年,中国科学院院刊,第68卷,第S130-S131页。视图:出版商的网站|谷歌学者
  16. L. B. Johnson, J. Aiken, D. Mooney等人,“肠系膜作为肝细胞移植的层压血管床。”细胞移植,第3卷,no。4,第273-281页,2017。视图:出版商的网站|谷歌学者
  17. 克奈瑟,pm。Kaufmann, H. C. Fiegel等人,“肝细胞和胰岛在聚合基质中共移植的相互作用”,菲尔绍档案,第435卷,no。2,页125-132,1999。视图:出版商的网站|谷歌学者
  18. E. Török, M. Lutgehetmann, J. Bierwolf等人,“可生物降解聚(l-乳酸)基质上的原代人肝细胞:用组织工程提高移植效率的有希望的模型,”肝移植,第17卷,no。2, pp. 104-114, 2011。视图:出版商的网站|谷歌学者
  19. C. Selden和H. Hodgson,《肝脏替代的细胞疗法》移植免疫学,第12卷,no。3-4页,273-288,2004。视图:出版商的网站|谷歌学者
  20. K. Alexandrova, C. Griesel, M. Barthold等人,“大规模分离人肝细胞用于治疗应用,”细胞移植,第14卷,no。10, pp. 845-853, 2017。视图:出版商的网站|谷歌学者
  21. T. Kawahara, C. Toso, D. N. Douglas等人,“体内模型中影响肝细胞分离、植入和复制的因素”,肝移植,第16卷,no。8, pp. 974-982, 2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
  22. L. Richert, E. Alexandre, T. Lloyd等人,“从废肝手术切除中优化人肝细胞分离所需的组织收集、运输和分离程序。一项多实验室研究。”肝脏国际,第24卷,no。4, pp. 371-378, 2004。视图:出版商的网站|谷歌学者
  23. S. Uyama, P. M. Kaufmann, T. Takeda和J. P. Vacanti,“使用聚合物装置和肝营养刺激递送整个肝脏等效的肝细胞质量,”移植,第55卷,no。4,第932-935页,1993。视图:出版商的网站|谷歌学者
  24. 欧洲肝脏研究协会,《EASL临床实用指南:酒精性肝病的管理》,肝病杂志,第57卷,no。2,页399-420,2012。视图:出版商的网站|谷歌学者
  25. a . a . Mokdad, a . D. Lopez, S. Shahraz等人,“1980年至2010年187个国家的肝硬化死亡率:系统分析,”BMC医学,第12卷,no。1,页145,2014。视图:出版商的网站|谷歌学者

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