) and progression-free survival (PFS, 67.3% vs. 41.0%, ). Similarly improved 5-year OS and PFS were observed for patients with HPV-positive versus negative disease (65.0% vs. 55.0%, ; 53.3% vs. 43.2%, , resp.). Patients with HPV-16 compared to other HPV diseases had worse 5-year OS and PFS (62.1% vs. 88.9%, ; 49.0% vs. 88.9%, , resp.). Conclusions. In contrast to the data derived from The Cancer Genome Atlas, patients with HPV-16 tumors trended towards decreased PFS and OS compared with tumors driven by other HPV genotypes. Further larger multi-institutional studies are necessary to understand the relationship between other HPV genotypes and survival in head and neck squamous cell carcinomas."> HPV亚型能预测头颈癌的预后吗? - betway赞助
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国际耳鼻喉科学杂志
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国际耳鼻喉科学杂志/2021/文章

研究文章|开放获取

体积 2021 |文章的ID 6672373 | https://doi.org/10.1155/2021/6672373

hedyh Ziai, Andrew Warner, Neil Mundi, Krupal Patel, Eun Jae Chung, Christopher J. Howlett, Paul Plantinga, John Yoo, S. Danielle MacNeil, Kevin Fung, Joe S. Mymryk, John W. Barrett, David A. Palma, Anthony C. Nichols， ＂HPV亚型能预测头颈癌的预后吗?"，国际耳鼻喉科学杂志， 卷。2021， 文章的ID6672373， 11 页面， 2021． https://doi.org/10.1155/2021/6672373

HPV亚型能预测头颈癌的预后吗?

Hedyeh Ziai，1 安德鲁·华纳，2 尼尔的描摹，1 Krupal帕特尔，1 恩在钟，1，3. Christopher j . Howlett，4 保罗Plantinga，4 约翰柳，1，2 美国丹尼尔·麦克尼尔，1，2 凯文冯，1，2 乔·s . Mymryk，1，2，5 约翰·w·巴雷特1，2et al。 David a .帕尔马，2 安东尼·c·尼克尔斯1，2

1加拿大西部大学耳鼻喉头颈外科

2加拿大西部大学肿瘤系

3.韩国首尔首尔大学耳鼻喉科

4加拿大西部大学病理学系

5加拿大西部大学微生物与免疫学学系

学术编辑器:Gerd j·里德尔
收到了 2020年10月28日
修改后的 2020年11月06
接受 2021年1月28日
发表 09年2月2021年

摘要

背景．最近，对癌症基因组图谱研究的再分析表明，除HPV-16外，头颈部癌症中的人乳头瘤病毒(HPV)基因型的生存率低于HPV-16阳性肿瘤。我们的目的是在我们机构的一大批患者样本中检验HPV亚型与生存率的关系。方法．在临床或手术时收集新鲜冷冻原发部位活检样本。同时也收集了患者的人口学、分期和生存数据。用定量聚合酶链式反应(qPCR)检测肿瘤的HPV亚型。单变量和多变量分析采用Cox比例风险回归。结果．在2011年至2017年期间收集了280例患者活检样本。平均±标准差(SD)年龄为61.9±11.1岁，以男性居多(78%)。大多数癌症是口腔癌(60%)或口咽癌(25%)，30%为hpv阳性疾病。中位随访时间为3.76年，96/280例患者(34%)出现复发。p16阳性与阴性患者的5年总生存率显著提高(OS, 77.6% vs. 53.3%; ）无进展生存期(PFS, 67.3% vs. 41.0%， )．hpv阳性与阴性患者的5年OS和PFS也有相似的改善(65.0% vs. 55.0%)。 ；53.3%和43.2%, ，职责)。与其他HPV疾病相比，HPV-16患者的5年OS和PFS更差(62.1% vs. 88.9%)。 ；49.0%和88.9%, ，职责)。结论．与来自癌症基因组图谱的数据相反，与其他HPV基因型驱动的肿瘤相比，HPV-16肿瘤患者的PFS和OS趋于降低。为了了解其他HPV基因型与头颈部鳞状细胞癌患者生存率之间的关系，还需要进一步进行更大规模的多机构研究。

1.简介

由于口腔感染人乳头瘤病毒(HPV)导致HPV相关头颈部癌症的比率不断上升，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)的亚群急剧上升[1，2］．尽管这些与hpv相关的肿瘤大多数位于口咽部，但也有一小部分来自其他部位的肿瘤，包括口腔、下咽、喉部和鼻咽部，也被证明与hpv相关。尽管有近200种HPV基因型，但只有几种高危HPV基因型被认为是头颈癌的诱因[3.- - - - - -5］．其中，HPV-16最常被检测到;最近的一项荟萃分析表明，82%的hpv阳性头颈癌可归因于HPV-16基因型[6］．

在前瞻性随机对照试验的背景下，HPV及其替代标记物p16已被明确证明是改善口咽内癌症生存率的独立预后生物标记物[7- - - - - -10］．局部区域进展期hpv相关患者的5年总生存率超过80%p16例阳性口咽鳞状细胞癌(OPSCC)接受放疗和化疗，而hpv阴性肿瘤接受类似方案治疗的患者约为40% [9，11］．由于hpv阳性患者的情况如此良好，对这一患者群体的降级治疗具有极大的兴趣，其目标是在保持治愈率的同时降低治疗毒性[9，12- - - - - -27］．

然而，关于HPV在鼻咽癌中的作用仍然存在一些重要的问题，特别是以下几点:(1)HPV是否在口咽以外的亚位点具有预后作用，(2)除16型外的HPV亚型是否具有同样的预后意义。然而，最近有高质量的数据解决了这些问题，而这些问题以前受到较小数据集的限制。与许多先前的研究结果相反，李和他的同事利用美国国家癌症数据库(NCDB)的数据，分析了所有鼻咽癌患者(n= 41,950)，已确定HPV状态(pvid 29801040)。他们发现hpv阳性的口腔、口咽、喉和下咽肿瘤患者比hpv阴性患者(口腔(风险比[HR] = 0.76;95% CI, 0.66-0.87)，口咽(HR = 0.44;95% CI, 0.41-0.47)，下咽(HR = 0.59;95% CI, 0.45-0.77)，喉部(HR = 0.71;95%可信区间,0.59 - -0.85))。不幸的是，每个患者的HPV类型无法得出特定类型的结论。

为了解决HPV类型的问题，Bratman和他的同事们重新分析了癌症基因组图谱(TCGA)队列，并利用RNA测序获得的病毒读数来确定确定的HPV状态和HPV类型。［3.我们注意到TCGA队列反映了一个外科系列，因为需要切除标本纳入[1］．亚部位分解如下:311例口腔癌，79例口咽癌，115例喉癌，10例下咽癌。在515个肿瘤中，在73个肿瘤中观察到HPV癌蛋白转录物(14%)。在73例hpv阳性肿瘤中，有61例(84%)表达HPV-16癌基因，而其余的属于33型(n= 8)， 35 (n= 3)， 56 (n= 1)。该分析显示，与HPV-16阳性的同类疾病相比，HPV-16以外的hpv -肿瘤类型的生存率较低，其生存率与hpv阴性的鼻咽癌相似。这表明，具有这些基因型的患者可能不适合进行降压治疗[28，29]，并应继续采用传统的非hpv相关鼻咽癌治疗算法。

Bratman的研究具有较大的样本量和通过RNA测序确定的HPV检测和分型等优势;然而，它也有不足之处，包括缺乏独立的验证队列，TCGA存活数据不完善[2]，以及30%的病人没有接受符合NCCN指引的治疗[3.］．为了从外部验证Bratman研究的发现，我们分析了前瞻性收集的大量头颈部鳞状细胞癌患者队列，以确定非HPV-16基因型是否可以预测更严重的疾病，并确定HPV类型和生存期之间的联系是否可重复。

2.材料和方法

2.1.患者人群

头颈部鳞状细胞癌患者将接受有治疗目的的治疗(一次放疗或一次手术)，通过伦敦健康科学中心头颈部癌症诊所进行前瞻性登记。远处转移、姑息性治疗、活检取样前已知复发或缺少HPV检测数据的患者被排除在外。收集临床资料，包括诊断年龄、烟酒使用情况、AJCC TNM分期(7th版本)、治疗方案和治疗后随访信息。作为常规临床护理的一部分，对大多数口咽癌原发患者(59/70)和一小部分其他病例(27/210)的福尔马林固定样本进行P16检测。

2.2.肿瘤组

在切除完成后，从临床活检或消融标本中心获取新鲜肿瘤，注意不要干扰边缘。冷冻切片分析证实肿瘤细胞>为70%。肿瘤被放置在冰上并被运送到研究实验室，其中一部分被冷冻，另一部分使用Qiagen试剂盒(Cat#: 69504)立即进行DNA提取。

2.3.HPV状态的qPCR分析

为了筛选临床样本中人乳头瘤病毒(HPV)的存在，我们设计了一种多重定量PCR来识别那些HPV阳性的样本，并确认阳性样本中的HPV类型。使用MacVector Ver.15软件(Primer3)设计的引物对肿瘤基因组DNA (gDNA)样本进行筛选，以扩增E6/中的小片段EHPV - 16，−18，−33，−35，−56的7个区域。我们还将HPV 18型纳入了我们的分析中，因为我们之前已经在头颈癌样本中发现了它的存在[29尽管事实是它没有在TCGA数据集中看到。GAPDH作为管家基因/内控基因。荧光染料(Cy5: GAPDH;Joe: HPV−16和−33;ROX: HPV−18和−35;FAM: HPV-56)被偶联到探针上，用于结合每个靶基因的扩增子。HPV−16和−18和GAPDH引物/探针集之前已经描述和优化。［29，30.我们设计引物/探针集(补充表1)针对GAPDH(内控)第6外显子内的115核苷酸片段，HPV-16的E6-E7区有110核苷酸片段，HPV-18的E6-E7区有137核苷酸片段，HPV-56的E6-E7区有68核苷酸片段，HPV-33的E6-E7区有80核苷酸片段，HPV-35的E6-E7区有99核苷酸片段。每个样品首先用GAPDH、HPV-16、HPV-18和HPV-56引物/探针混合物运行，然后用GAPDH、HPV-33、HPV-35和HPV-56混合物再次运行相同的样品。

qPCR反应(10μl)用定量多重PCR no ROX试剂盒(QIAGEN)制备，阳性率为0.2μl的模板gDNA。采用Stratagene Mx3000P进行qPCR，条件如下:95°C热失活/酶活化1个循环，持续15分钟，94°C变性40个循环，持续60秒，60°C退火/延伸90秒。

分别使用CaSki和HeLa细胞系的基因组DNA作为HPV-16和−18阳性对照。HPV-33、−35和−56质粒被用作阳性对照，分别用于确认HPV-33、−35和−56 DNA的存在。没有使用模板控制(NTC)来确定每个探头的基线，以确定阈值循环(Ct)值。GAPDH Ct≥35的样品表明gDNA收率较低。任何荧光染料大于Ct≥35的信号都被认为是有问题的，在进行评估之前进行重复。

2.4.统计分析

对所有患者进行描述性统计，并按HPV状态分层(HPV-16、HPV-其他vs.阴性)，采用卡方检验或Fisher精确检验、方差分析(ANOVA)或Kruskal-Wallis检验进行比较。总生存期计算为从就诊日期到最后一次随访日期和/或死亡(任何原因)的时间，以先到者为准。无进展生存期计算为从就诊日期到最后一次随访日期和/或复发和/或死亡(任何原因)的时间，以先到者为准。Kaplan-Meier对所有患者的OS和PFS进行了估计，包括接受初级外科治疗的患者(不包括非手术初级治疗，如器官保存放化疗)和仅患有口咽癌的患者，按HPV和p16状态分层，并使用log-rank检验进行比较。对所有患者进行单变量和多变量Cox比例风险回归，以确定OS和PFS的重要预测因素。所有符合条件的变量与单变量 <0.05的值被纳入一个多变量回归模型，然后使用逆向消除技术依次去除，直到所有剩余的协变量 值< 0.05。所有统计分析均采用SAS 9.4版本软件(SAS Institute, Cary NC)进行，采用0.05显著性水平双侧统计学检验。

3.结果

3.1.基线特征

在2011年至2017年期间，我们获得了280例符合纳入标准的鼻咽癌患者的活检样本。基线患者和肿瘤特征见表1．平均±SD年龄为61.9±11.1岁，以男性(77.5%)为主，其中口腔(60.4%)或口咽部(25.0%)癌。大部分患者接受了一次手术治疗(76.1%)。HPV阳性84例(30.0%)，其中HPV-16为75例(26.8%)，HPV-18为5例(1.8%)，HPV-33为1例(0.4%)，HPV-35为3例(1.1%)，经HPV基因组DNA检测证实。在9例(3.2%)患者中发现了其他HPV疾病(HPV-16阴性患者定义为HPV阳性疾病)。在临床护理背景下测定了86例患者的P16状态。86例中有50例(58%)呈阳性，其中41/46例(89.1%)为HPV-16阳性，5/6例(83.3%)为其他HPV类型阳性，4/34例(11.7%)为HPV阴性。
特征 所有患者(n= 280) 人乳头状瘤病毒状态 价值
HPV-negative (n= 196) hpv 16 (n= 75) HPV-other (n= 9)
年龄(年)-平均值±标准差 61.9±11.1 62.7±11.1 60.8±10.3 53.8±13.2 0.034
男- - - - - -n（％） 217 (77.5) 148 (75.5) 61 (81.3) 8 (88.9) 0.418
T台,n（％）
T1 20 (7.2) 12 (6.2) 8 (10.8) 0 (0) 0.113
T2 96 (34.5) 61 (31.3) 31 (41.9) 4 (44.4)
T3 57 (20.5) 38 (19.5) 17 (23.0) 2 (22.2)
T4 105 (37.8) 84 (43.1) 18 (24.3) 3 (33.3)
N阶段-n（％）
N0 124 (44.4) 91 (46.4) 27日(36.5) 6 (66.7) 0.221
N1 42 (15.1) 24 (12.2) 17 (23.0) 1 (11.1)
N2 108 (38.7) 78 (39.8) 28日(37.8) 2 (22.2)
N3 5 (1.8) 3 (1.5) 2 (2.7) 0 (0)
总体阶段(AJCC 7th版)-n（％）
我 8 (2.9) 5 (2.6) 3 (4.1) 0 (0) 0.415
2 47 (16.9) 34 (17.4) 10 (13.5) 3 (33.3)
3 52 (18.6) 32 (16.3) 18 (24.3) 2 (22.2)
4 172 (61.7) 125 (63.8) 43 (58.1) 4 (44.4)
酗酒,n（％） 110 (39.3) 83 (42.4) 24 (32.0) 3 (33.3) 0.276
吸烟包年平均值±SD 27.2±26.8 27.4±23.2 26.2±34.9 32.2±26.7 0.345
围神经的入侵,n（％） 84 (39.3) 74 (43.0) 8 (23.5) 2 (25.0) 0.071
淋巴结外侵犯,n（％） 43 (20.3) 39 (22.8) 3 (9.1) 1 (12.5) 0.171
Lymphovascular入侵,n（％） 54 (26.0) 44 (26.0) 9 (29.0) 1 (12.5) 0.636
非手术治疗,n（％） 67 (23.9) 23日(11.7) 42 (56.0) 2 (22.2) < 0.001
辅助治疗,n（％） 147 (52.5) 120 (61.2) 21日(28.0) 6 (66.7) < 0.001
p16 +阳性/测试数量(%) 50/86 (58.1) 4/34 (11.7) 41/46 (89.1) 5/6 (83.3) < 0.001
人乳头状瘤病毒人类乳头状瘤病毒;加粗的数字表示 值< 0.05。
表1
按HPV状态分层的基线患者和肿瘤特征(n= 280)。

与hpv阴性患者相比，HPV-16和其他hpv阳性患者往往更年轻( ）患T4疾病的可能性较低( )，围神经的入侵( )，结外延伸( )．hpv -16阳性患者接受更多非手术治疗( ）辅助治疗较少( ）与HPV阴性和其他HPV患者相比。此外，与HPV阴性患者相比，HPV-16阳性和其他HPV患者更易发生口咽原发(分别为64.0%、44.4%和9.2%)，而较少发生口腔原发(分别为20.0%、44.4%和76.5%)。 )．

3.2.生存的结果

中位随访时间为3.76年(95%可信区间[CI]: 2.87-4.21)。92例(32.9%)死亡，96例(34.3%)复发。所有患者5年OS和PFS分别为57.9%和46.3%。与hpv阴性患者相比，hpv阳性患者的5年OS和PFS均有改善(65.0% vs. 55.0%)。 ；53.3%和43.2%, ，职责);然而，这并不显著(图1)．与其他HPV患者相比，HPV-16患者的5年OS和PFS更差(62.1% vs. 88.9%); ；49.0%和88.9%, ，职责)。在纳入hpv阴性患者后，这对OS和PFS均不显著(OS: ；PFS: ，数字2)．与HPV阴性(35.2%)和HPV-16阳性(34.7%)相比，其他HPV疾病患者的复发发生率(11.1%)较低;然而，这并不显著( )．相比之下，p16阳性患者的5年OS和PFS明显优于p16阴性患者p16种未知疾病(77.6% vs. 53.3%) ；67.3%和41.0%, ，分别地。，数字3.)．

(一)＂name=
(一)
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(b)
图1
Kaplan-Meier图按HPV状态(阳性vs阴性)分层(a)总体生存期和(b)所有患者的无进展生存期(n= 280)。
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(一)
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(b)
图2
Kaplan-Meier图按HPV状态分层(HPV-16 vs. HPV-其他vs. HPV阴性)，用于(a)所有患者的总生存期和(b)无进展生存期(n= 280)。
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(一)
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(b)
图3
Kaplan-Meier图按p16状态(阳性vs.阴性/未知)分层(a)所有患者的总生存期(b)无进展生存期(n= 280)。
3.3.考克斯比例危害回归

单变量和多变量Cox比例风险回归模型的结果见表2．单变量分析发现年龄较大(每5年风险比[HR]: 1.12， )，酗酒(HR: 1.67， )，T4 vs T1-T2疾病(HR: 2.64， )，N2-N3对N0疾病(HR: 2.41， )，IV期与I-II期疾病(HR: 3.11， )，神经周侵犯(HR: 2.58， )，结外扩张(HR: 2.92， )，淋巴血管侵犯(HR: 2.81， ）作为较差OS的显著预测因子。p16阳性疾病显著预示着更好的OS (HR: 0.41， )．IV期与I-II期疾病(HR: 4.67， ）神经周围侵犯(HR: 2.53， ）从多变量分析来看，仍能显著预测较差的OS。
因变量: 总生存期 无进展生存
变量: 人力资源(95%置信区间) p价值 人力资源(95%置信区间) 价值
单变量:
确诊时年龄(每5岁) 1.12 (1.02, 1.24) 0.018 1.08 (1.00, 1.17) 0.059
酗酒(vs.没有) 1.67 (1.10, 2.52) 0.015 1.33 (0.94, 1.90) 0.110
位置 0.749 0.314
口腔vs口咽 1.36 (0.82, 2.26) 0.227 1.30 (0.85, 2.00) 0.232
喉与口咽 1.05 (0.49, 2.23) 0.899 1.80 (1.01, 3.21) 0.047
下咽部和口咽 1.41 (0.48, 4.12) 0.527 0.99 (0.35, 2.83) 0.985
其他与口咽 0.86 (0.12, 6.42) 0.886 0.61 (0.08, 4.50) 0.630
T台 < 0.001 0.031
T3和t1 - t2 1.52 (0.83, 2.78) 0.179 1.54 (0.96, 2.47) 0.075
T4和t1 - t2 2.64 (1.63, 4.30) < 0.001 1.70 (1.13, 2.54) 0.011
N阶段 < 0.001 0.036
N1与N0 1.39 (0.71, 2.72) 0.332 0.95 (0.54, 1.66) 0.851
N2-N3与N0 2.41 (1.53, 3.80) < 0.001 1.56 (1.07, 2.28) 0.020
总体阶段(AJCC 7th版) < 0.001 0.226
三世与i ii 1.42 (0.60, 3.38) 0.423 0.97 (0.53, 1.77) 0.917
第四与i ii 3.11 (1.55, 6.23) 0.001 1.36 (0.85, 2.20) 0.204
神经周侵犯(vs.否) 2.58 (1.61, 4.14) < 0.001 1.91 (1.27, 2.88) 0.002
结外扩展(vs.否) 2.92 (1.73, 4.93) < 0.001 2.05 (1.27, 3.30) 0.003
淋巴血管侵犯(vs.否) 2.81 (1.73, 4.56) < 0.001 1.72 (1.11, 2.66) 0.016
新辅助治疗(vs.没有) 1.93 (0.89, 4.19) 0.096 2.84 (1.53, 5.30) 0.001
非手术治疗(vs.否) 0.61 (0.37, 1.02) 0.058 0.87 (0.58, 1.30) 0.502
辅助治疗(vs.没有) 1.46 (0.96, 2.22) 0.076 1.07 (0.75, 1.52) 0.714
人乳头状瘤病毒+(与HPV−) 0.66 (0.41, 1.06) 0.086 0.70 (0.47, 1.04) 0.073
人乳头状瘤病毒状态 0.168 0.099
hpv 16和HPV-Other 2.90 (0.39, 21.5) 0.299 4.83 (0.66, 35.3) 0.121
HPV-negative与HPV-other 4.06 (0.56, 29.3) 0.164 6.23 (0.87, 44.7) 0.069
p16 +(与p16 - /未知) 0.41 (0.21, 0.82) 0.011 0.48 (0.28, 0.82) 0.008
多变量:
T台 - - - - - - 0.022
T3和t1 - t2 - - - - - - - - - - - - 1.48 (0.84, 2.61) 0.172
T4和t1 - t2 - - - - - - - - - - - - 2.01 (1.22, 3.29) 0.006
N阶段 - - - - - - 0.007
N1与N0 - - - - - - - - - - - - 1.00 (0.49, 2.01) 0.989
N2-N3与N0 - - - - - - - - - - - - 2.00 (1.27, 3.16) 0.003
总体阶段(AJCC 7th版) < 0.001 - - - - - -
三世与i ii 1.26 (0.42, 3.76) 0.676 - - - - - - - - - - - -
第四与i ii 4.67 (2.01, 10.9) < 0.001 - - - - - - - - - - - -
神经周侵犯(vs.否) 2.53 (1.58, 4.07) < 0.001 1.60 (1.04, 2.46) 0.034
新辅助治疗(vs.没有) - - - - - - - - - - - - 4.28 (2.07, 8.85) < 0.001
人力资源:风险比,CI:置信区间;人乳头状瘤病毒:人乳头瘤病毒;加粗的数字表示 值< 0.05。
表2
总生存期和无进展生存期的单变量和多变量Cox比例危险回归(n= 280)。

与PFS类似，单变量分析发现T4与T1-T2疾病(HR: 1.70， )，N2-N3对N0疾病(HR: 1.56， )，神经周侵犯(HR: 1.91， )，结外扩张(HR: 2.05， )，淋巴血管侵犯(HR: 1.72， )，接受新辅助治疗(HR: 2.84， ）作为低PFS的显著预测因子。p16阳性疾病可显著预测PFS的改善(HR: 0.48， )．从多变量分析来看，T4与T1-T2疾病(HR: 2.01， )，N2-N3对N0疾病(HR: 2.00， )，神经周侵犯(HR: 1.60， ）接受新辅助治疗(HR: 4.28， ）仍然显著预示着更糟糕的PFS。

3.4.主要的外科治疗

203例患者接受了初次手术治疗(不包括器官保存放化疗等非手术初次治疗)。与280名初始队列患者相比，这些患者更容易患口腔癌(79.8% vs. 60.4%)，接受辅助治疗(71.4% vs. 52.5%)，而hpv阳性(19.7% vs. 30.0%)、hpv -16阳性(16.3% vs. 26.8%)和p16阳性(6.4% vs. 17.9%)的可能性更小。与hpv阴性患者相比，hpv阳性患者的5年OS改善，但5年PFS相似(62.1% vs. 54.1%， ；44.4%和46.8%, ，)，两者都不显著。与其他HPV疾病相比，HPV-16阳性患者5年OS较差，5年PFS明显较差(52.1% vs. 100%)。 ；29.4%和100%, ，职责);然而，在纳入hpv阴性患者后，这并不显著(OS: ；PFS: )．尽管与p16阴性/未知疾病患者相比，p16阳性疾病患者的5年OS和PFS有所改善，但这不再显著(69.9% vs. 54.0%; ；63.5%和44.5%, ，职责)。

3.5.口咽鳞状细胞癌

一些研究表明，与HPV阳性状态相关的生存改善不适用于口咽以外的亚部位癌[31］．出于这个原因，我们重复了我们的分析，只关注口咽癌。最初队列中有70例患者患有OPSCC。这些患者较少发生T4疾病(14.5% vs. 37.8%)神经周侵犯(27.3% vs. 39.3%)和接受辅助治疗(12.9% vs. 52.5%)，但更容易发生淋巴血管侵犯(35.0% vs. 26.0%)和切缘阳性(16.7% vs. 6.7%)和接受非手术治疗(72.9% vs. 23.9%)、hpv阳性(74.3% vs. 30.0%)、hpv -16阳性(68.6% vs. 26.8%)和p16阳性(64.3% vs. 17.9%)。观察到hpv阳性和阴性患者的5年OS和PFS改善，尽管这并不显著(68.0% vs. 46.8%， ；60.5%和37.5%, ，分别地。，数字4)．HPV-16阳性患者与其他HPV疾病患者比较无显著差异(OS: ；PFS: ，职责)。与p16阴性患者相比，p16阳性患者的5年OS和PFS明显改善(79.9% vs. 30.5%)。 ；68.6%和28.1%, ，职责)。

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图4
Kaplan-Meier图按HPV状态(阳性vs阴性)分层(a)总体生存期和(b)无进展生存期，按HPV状态(HPV-16 vs. HPV-其他vs. HPV阴性)分层(c)口咽癌患者的总体生存期和(d)无进展生存期(n= 70)。

4.讨论

关于病毒基因型对肿瘤控制和生存的预后影响，文献包含有限的数据。目前有近200种已知的HPV基因型，其中一些高危基因型被认为是OPSCC的诱因。这些包括HPV−16、−18、−33、−45、−52和−58 [32］．我们调查了头颈部癌症中不同HPV基因型的预后重要性。我们的研究结果支持HPV-18在鼻咽癌中低发病率的发现[6］．我们的研究并没有证实先前的研究结果，即HPV-16基因型患者的头颈部生存率高于其他HPV基因型[3.，33- - - - - -35和其他癌症[35，36］．

与Bratman及其同事的研究相反，患有HPV-16型疾病的患者并不比患有其他HPV基因型疾病的患者有更高的生存率。相反，由其他类型(HPV-18， - 33， - 35)疾病引起的患者似乎更好，无进展生存期有改善的趋势(图)2 (b))．与p16阴性疾病患者相比，p16阳性疾病患者的生存期明显改善;然而，这在多变量分析中并不显著。我们承认，这项工作被多个子位点和异质处理所混淆;然而，我们从我们的肿瘤库中选择了这一人群，以反映TCGA头颈队列中包含的大量外科系列。由于TCGA队列中的hpv阳性样本主要来自口咽(73例中有53例)，我们仅使用来自该子位点的队列样本重复了我们的分析。这也没有发现hpv -其他疾病的不良预后。因此，尽管在患者人群中有相似之处，我们发现了相互矛盾的结果。

我们的数据支持先前的文献，即p16表达与改善生存率密切相关，包括口咽以外的部位(图3.)．p16表达在口咽鳞状细胞癌中的预后意义已被证实[9，37- - - - - -39]，最近在非口咽鼻咽癌的前瞻性试验中被证实[36］．与Chung等人的研究类似，尽管p16具有很强的预后作用，但在这一异质人群中，HPV状态与生存期略有相关，只有改善无进展的趋势，而不是总体生存期(图1)．造成这种差异的原因尚不清楚。可以想象的是，一些p16阳性病例是由于我们没有检测的HPV类型，这可能代表了该研究的一个缺陷。事实上，我们的测试仅限于Bratman研究中确定的HPV亚型和HPV-18。然而，文献表明情况可能并非如此[37］．在这些p16阳性但hpv阴性的肿瘤中，分子差异可能尚未被理解，这使得它们对治疗敏感。因此，p16可能代表了口咽外的一种优越的生物标志物。

最近的研究表明，对hpv相关的头颈部癌症进行减弱治疗是一种很有前途的治疗策略，疗效相似，毒性降低[28，40- - - - - -44］．治疗减弱的最终目标是降低发病率和功能影响，包括吞咽困难、言语相关毒性、肾脏和血液毒性[26，45同时保持良好的肿瘤预后。hpv相关头颈癌患者被认为对治疗的反应明显高于传统的烟草和酒精相关头颈癌[11，26］．通过不过度治疗使患者的生活质量最大化是放疗剂量减少和/或同步化疗的改变一致支持的目标。在选定的hpv阳性疾病队列中，治疗减弱是一个合理的目标。预处理预测在治疗计划中是必不可少的。特别是，hpv相关疾病的存在和确定适当的非强化治疗候选者对于维持既往在hpv相关OPSCC患者中所见的良好预后至关重要。p16的免疫组化阳性结果通常被用作分子型HPV检测的替代物，这是基于这两个生物标志物之间的高度一致性。然而，p16 IHC分析不能区分HPV基因型。我们的研究未能验证Bratman等人此前关于改善HPV-16疾病患者生存结局的研究。相比之下，我们观察到，与HPV-18、−33和−35疾病患者相比，HPV-16基因型患者的生存率较低，无显著性差异;然而，鉴于我们的研究中HPV-18/33/35患者数量相对较少，这需要未来在更大的队列中进行验证(n= 9)。

我们建议进行更大规模的多机构研究，以确定HPV基因型对头颈部鳞状细胞癌患者的影响。尽管HPV基因分型在头颈癌中还没有广泛应用，但我们认为HPV基因分型应该在未来HPV阳性头颈癌的管理中成为常规。我们的风险分层能力可以通过使用其他潜在的辅助生物标记物来改进，以更好地帮助医生选择适当的去强化患者。未来的去强化治疗方案应考虑hpv阳性肿瘤类型的复发模式。如果患者的基因型生存率低于hpv阴性的头颈癌患者，那么将被排除在治疗减弱的考虑之外。

虽然我们的患者数据收集和肿瘤收集是前瞻性的，但我们的研究有局限性。我们的队列涉及了各种不同的治疗方案治疗的肿瘤部位，可能会掩盖重要的发现。此外，具有其他HPV基因型的肿瘤数量相对较少，这可能限制了检测显著差异的能力。鉴于其他HPV类型的罕见，可能需要大量的多机构机构的努力来有足够的力量最终回答这个问题。

5.结论

据我们所知，这项研究是第一次尝试验证Bratman和他的同事关于头颈部癌症中HPV基因型预后意义的发现。与他们的研究结果相反，与HPV-16相关疾病相比，非16型hpv患者的无进展生存期有改善趋势。需要大量的、多机构的努力来最终确定鼻咽癌中HPV类型和生存率的相关性。

缩写

人乳头状瘤病毒: 人类乳头状瘤病毒
qPCR: 定量聚合酶链反应
操作系统: 总生存期
PFS: 无进展生存
HNSCC: 头颈部鳞状细胞癌
TCGA: 癌症基因组图谱
OPSCC: 口咽鳞状细胞癌
gDNA: 基因组DNA
全国过渡委员会: 没有模板控制
Ct: 阈值周期
方差分析”: 方差分析
人力资源: 风险比。

数据可用性

本研究中使用和/或分析的数据集可根据合理要求从通讯作者处获得。

伦理批准

研究伦理委员会在研究开始前获得了西安大略大学的批准(HSREB #6615)。

的利益冲突

作者声明，他们没有与本研究及其出版相关的经济或其他利益冲突。

作者的贡献

HZ, DAP和ACN设计了这项研究。HZ、JB、NM、KP进行数据收集。EC、DM、ACN、JY、KF进行前瞻性肿瘤收集。PP和CJH进行了病理回顾。HZ、JB、ACN、DAP、AW进行数据分析和数据解释;起草的手稿;并修改它。所有的作者都阅读并修改了最终的手稿。

致谢

HPV-33质粒是巴斯德研究所Michel Favre博士的礼物，HPV-35和-56质粒是Andreas Schaeffer博士代表Attila Lorincz博士，Qiagen, Gaithersburg, M.D.的礼物。MOP 340674发至ACN，批文编号为。MOP 142491到JSM和CAN)。ACN得到了头颈部癌症生物学沃尔夫外科研究教授基金的支持。

补充材料

补充表1:HPV引物/探针组。（补充材料）

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