核酸杂志

需要参考材料来量化细胞中的DNA损伤水平，评估测量可变性的来源，并比较不同实验室的结果。彗星试验(单细胞凝胶电泳)是一种广泛使用的方法来确定DNA损伤的形式链断裂。在这里，我们研究了在培养的哺乳动物细胞中使用电化学氧化产生DNA损伤，并使用彗星试验来量化其百分比。中国仓鼠卵巢(CHO)细胞生长在氧化铟锡电极表面，暴露在0.5 ~ 1.5 V (vs Ag/AgCl)的电化学电位中12 h。收集的细胞通过彗星和细胞活力试验进行分析。我们观察到随着氧化电位值的增加，随着细胞活力的丧失，链断裂的百分比(尾部DNA)呈线性增加。结果表明，在良好的控制条件下，电化学诱导的DNA损伤可在哺乳动物细胞中产生，可作为彗星实验的细胞参考材料。

纤溶酶基因(fibE)是普遍保守的芽孢杆菌属第一类种。它编码一种在细胞外培养基中分泌的丝氨酸样酶(FibE)。本研究旨在评估这一新的保守家政基因在I类中的分子有用性芽孢杆菌对刚果共和国传统发酵食品和饮料中的相关菌种进行鉴定。首先，用酪蛋白水解法筛选了155株菌株的酶活性。采用PCR技术和采用特异性引物并与16S RNA测序相关的巢式PCR方法。印迹技术已经与分子方法进行了深入的比较。作为一个结果b . amyloliquefaciens (1)，地衣芽b (1)，枯草芽孢杆菌(1)，b、(3)，b . altitudinis(2),b . atrophaeus (1),b . safensis (3)已在发酵食品和饮料中发现的155株分离菌中特异性鉴定。FibE成熟蛋白融合谷胱甘肽s -转移酶(GSTs)的遗传分析及过表达大肠杆菌与野生型相比，BL21和TOP10的酶活性提高了2倍。免疫检测应与之相关，但不能明显区分芽孢杆菌属于第一类。

吉西他滨(2 ',2 ' -difluorodeoxycytidine;dFdC)是一种脱氧胞苷类似物，主要用于治疗胰腺癌。吉西他滨的细胞毒性是由于抑制DNA复制。然而，去除合并的dFdC的机制在很大程度上是未知的。在本报告中，我们发现核苷酸切除修复蛋白XPF- ercc1参与了吉西他滨诱导的DNA损伤的修复，而XPF的失活使细胞对吉西他滨敏感。进一步分析发现，XPF-ERCC1与无嘌呤/嘧啶内切酶(APE)共同作用于吉西他滨诱导的DNA损伤的修复。我们的结果证明了在吉西他滨治疗中评估DNA修复活动的重要性。

netrin是一个分泌蛋白和膜相关蛋白家族。Netrins通过调节细胞迁移和存活参与轴突引导、形态发生和血管生成过程。这些过程在肿瘤生物学中具有特殊的意义。从netrin基因的不同亚型翻译和调节可变剪接。我们在这里回顾netrin家族成员的多样性亚型和他们已知的和潜在的作用在癌症。

DNA损伤是癌症的一个标志，而维持基因组保真度的蛋白质的突变和错误调节与多种癌症的发展有关。DNA双链断裂被认为是最有害的DNA损伤类型。非同源末端连接(nonhomologous end-joining, NHEJ)途径是修复DNA双链断裂的一种机制，参与NHEJ的蛋白也可能调控DNA复制。我们之前确定DNA-PKcs，一种NHEJ蛋白，在细胞暴露于复制应激后促进基因组稳定性和细胞活力;我们想弄清楚另一种NHEJ蛋白，DNA连接酶IV (Lig4)是否也有这种表型。我们的研究集中在三阴性乳腺癌细胞上，与非基底乳腺癌相比，LIG4Lig4经常被扩增，基因剂量的增加与Lig4的高表达有关。我们使用siRNA耗尽Lig4，并通过qPCR和western blotting证实了我们的敲除。细胞存活率随着Lig4的耗尽而下降，这与复制叉停止增加有关。在lig4耗尽的细胞中，检查点蛋白Chk1的激活和去磷酸化没有变化。羟基脲暴露后，Lig4耗尽导致DNA-PKcs持续磷酸化。了解Lig4对基因组复制和复制应激反应的影响将阐明抑制Lig4活性的生物学后果。此外，Lig4是一个很有吸引力的临床靶点，可以将CRISPR/ cas9介导的修复导向同源性修复，而不是NHEJ，因此了解减少Lig4如何影响细胞生物学是至关重要的。

α -1-抗胰蛋白酶(AAT)缺乏是一种遗传疾病，由于编码AAT的SERPINA1基因突变，导致AAT失活/缺陷。该疾病与肺部AAT活性下降和肝脏过度缺陷AAT蛋白沉积有关。目前，对于与AAT缺乏相关的肝病，还没有专门的治疗方法。AAT肺病通常用几种血清蛋白替代产品中的一种治疗;然而，SerpinA1替代疗法的有效性的长期研究还没有，而且它不能减少AAT缺乏症的肝损伤。mRNA疗法可能同时针对AAT缺乏患者的肝和肺。将编码SerpinA1的mRNA转染AAT患者成纤维细胞和AAT患者成纤维细胞来源的肝细胞，并检测细胞培养基中SerpinA1的表达。我们的数据表明，在AAT患者成纤维细胞和AAT患者成纤维细胞来源的肝细胞培养液中，SerpinA1蛋白增加。在野生型小鼠体内的研究表明，SERPINA1 mRNA在肝脏和肺部的生物分布，以及SERPINA1蛋白在这两个靶器官的表达，这两个器官在AAT缺乏中受到严重影响。综上所述，我们的数据表明SerpinA1 mRNA治疗有可能使AAT缺乏症患者受益。