标志”src=

PPAR研究
PDF
PPAR研究/2021年/文章
特殊的问题

过氧物酶体的作用Proliferator-Activated受体(PPARs)疾病和有针对性的治疗

把这个特殊的问题

研究文章|开放获取

体积 2021年 |文章的ID 6632137 | https://doi.org/10.1155/2021/6632137

自弃Cheng Chuanyong郭, ”Pemafibrate预处理变弱肝缺血再灌注损伤中细胞凋亡和自噬调节JAK2 / STAT3β/ PPARα通路”,PPAR研究, 卷。2021年, 文章的ID6632137, 15 页面, 2021年。 https://doi.org/10.1155/2021/6632137

Pemafibrate预处理变弱肝缺血再灌注损伤中细胞凋亡和自噬调节JAK2 / STAT3β/ PPARα通路

自弃程1和 Chuanyong郭1

1美国胃肠病学、上海第十人民医院、同济大学医学院200072年上海,中国

学术编辑器:克里斯托弗·刘
收到了 2020年11月06
接受 2021年3月01
发表 2021年3月11日

文摘

肝缺血再灌注损伤(HIRI)是一种常见的现象在肝移植和肝手术。本文旨在澄清pemafibrate HIRI通过JAK2 / STAT3的角色β/ PPARα。在实验中,我们将Balb / c分成七个组,即正常控制(数控),骗局,PEM(1.0毫克/公斤),IRI, IRI + PEM(0.1毫克/公斤),IRI + PEM(0.5毫克/公斤),和IRI + PEM(1.0毫克/公斤)。我们使用生化测定、组织病理学评估、免疫组织化学、rt - pcr和存在,ELISA分析,和其他方法来确定血清AST水平,ALT, il - 1β和肿瘤坏死因子-α在肝脏在三个时间点(2 h、8 h和24 h)再灌注后细胞凋亡因子,自噬的因素,JAK2 / STAT3 / PPARα内容组织。我们的实验结果表明,该pemafibrate能有效减少肝红外受伤。此外,pemafibrate有抗炎、抗凋亡和antiautophagy效果,这是由JAK2 / STAT3β/ PPARα途径。

1。介绍

肝缺血再灌注损伤(HIRI)是由肝脏缺血后再灌注造成的损害(1,2]。后肝组织的血液供应中断是由于肝缺血,随后的血液再灌注带来大量的炎症细胞,从而导致严重损害肝脏的结构和功能3- - - - - -5]。缺血再灌注损伤是一个复杂的病理生理过程。大量的研究表明,HIRI,涉及大量的细胞和多种分子机制,特点是氧化应激和释放活性氧(ROS) (3,6- - - - - -8]。ROS的起点是引起一连串的反应由炎症细胞、细胞因子释放,细胞凋亡和自噬9,10]。这不仅损害影响肝脏,但也有严重的负面影响大脑,心脏,肾脏,胃肠道,是一个复杂的系统过程。

当衰老大分子物质出现在和损伤的细胞,这些细胞会启动程序性细胞死亡。自噬是一种程序性细胞死亡,是一个复杂的过程,确保细胞的正常功能和红晕终于散去的时候消化材料有效地维持细胞的正常活动(11]。尽管自噬被认为是一种自我保护机制,upregulation过多也会导致细胞死亡(12]。另一种程序性细胞死亡,细胞凋亡已经非常明显的形态特征,包括细胞体积减少,核染色质收缩,凋亡体的形成。有两个核心细胞凋亡通路的分子家庭:bcl - 2家族和半胱天冬酶家族(13]。

Janus激酶(激酶)/信号传感器和激活的转录(STAT)参与信号转导引起一系列细胞因子和体内干扰素。从JAK2接收信号后,STAT3磷酸化后形成二聚体,进入核调节相关基因的转录。STAT3主要参与调节细胞增殖、分化、凋亡和炎症14- - - - - -16]。有两种亚型的STAT3: STAT3α和STAT3β。有趣的是,研究表明STAT3α和STAT3β对癌症有相反的影响,但STAT3的角色呢β在细胞仍有争议(17]。

过氧物酶体proliferator-activated受体(PPAR)是核受体超家族的一员18]。作为转录因子,转录PPAR建立联系和信号分子,包括PPARα,PPARβ,PPARγ。PPARα肝脏中高度表达,肠道上皮细胞,心肌细胞和脂肪酸氧化中起着重要的作用。它将结合类维生素a X受体(RXR)形成异质二聚体,激活PPAR响应元件(PPRE)位于上游的目标基因,并参与核转录因子的调控κB (NF -κB)和激活蛋白1 (AP-1) [18,19]。新型选择性PPAR Pemafibrateα调制器(SPPARMα),提高PPARα的活动和高选择性的侧链引入神经纤维酸。这些侧链后形成一个y形结构并填写PPAR的配体结合位点α,从而促进大规模PPAR的激活α。与其他一类相比,pemafibrate特性基本EC50值和更高的选择性。Pemafibrate能够更好地瞄准特定目标和降低绑定多个站点的风险。

HIRI虽然有很多研究,分子机制和有效的药物损伤仍不确定。因此,找出特定的药物,可以减轻HIRI和阐明药物作用机制是目前需要解决的紧迫问题。我们假设pemafibrate可以减轻HIRI通过抑制炎症、细胞凋亡和自噬进行以下实验。

2。材料和方法

2.1。试剂

pemafibrate从MedChemExpress购买(美国新泽西州蒙茅斯结)通过添加10% DMSO溶液和90%玉米油和使用在我们的实验。微型板块测试工具用于测量水平的丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)买的建成生物工程研究所(南京建成生物技术,中国)。酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒从Anogen获得(加拿大安大略省)。PrimeScript RT试剂盒和SYBR预混料交货Taq买来豆类生物技术(中国大连)。

在整个实验过程中,我们使用了许多抗体,包括anti-Bax anti-caspase 3, anti-Beclin-1, PPAR anti-caspase 9日α(美国)Proteintech、芝加哥、IL anti-TNF -α1、anti-Bcl-2 anti-microtubule相关蛋白轻链3 (LC3) anti-JAK2, anti-STAT3, anti-p-STAT3(细胞信号技术,丹弗斯、马、美国),anti-IL-6, anti-IL-1β(抗体革命,圣地亚哥、钙、美国)。

2.2。动物的准备

本研究的协议是动物保健和使用委员会批准上海同济大学。我们处理和照顾动物的美国国立卫生研究院的指导方针的指导下,我们最好尽量减少痛苦和折磨的老鼠在整个实验。我们提高了雄性Balb / c小鼠(6 - 8周大, g)从上海购买SLAC实验动物有限公司有限公司(上海,中国)在一个干净和温度控制的环境 在12 h: 12 h /光:暗周期。在标准实验室环境,食物和水都可以自由的老鼠。

2.3。实验设计

我们将一百零二小鼠随机分成7组如下:(1)正常的控制(数控)。六只老鼠注射车辆(10% DMSO溶液和90%玉米油)(2)虚假的。十八个老鼠把剖腹手术麻醉后,他们的腹腔缝没有IRI(3)PEM(1.0毫克/公斤)。六只老鼠注射1.0毫克/公斤PEM(4)IRI。十八个老鼠遭受缺血和再灌注(5)IRI + PEM(0.1毫克/公斤)。之前IRI,十八岁的老鼠注射0.1毫克/公斤PEM 5天(6)IRI + PEM(0.5毫克/公斤)。之前IRI,十八岁的老鼠注射0.5毫克/公斤PEM 5天(7)IRI + PEM(1.0毫克/公斤)。之前IRI,十八岁的老鼠注射1.0毫克/公斤PEM 5天(20.- - - - - -22]

鉴于PEM的药物动力学和初始实验IRI前5天,一定剂量的PEM由先前的研究和初步的实验是注射到老鼠的腹部。在2 h, 8 h,或后24 h IRI,我们每组随机杀了六只老鼠,然后收集血液和肝脏组织进行进一步的实验。

2.4。建立肝IRI小鼠模型

在这个实验中,我们建立了一个温暖肝IRI动物模型。手术前,我们不让老鼠进食12小时,但允许他们自由地喝水,然后用戊巴比妥钠(40毫克/公斤,1.25%)(戊巴比妥钠,圣路易斯,密苏里州,美国)麻醉小鼠腹腔内注射。当这些老鼠的痛觉完全消失,我们开始进行剖腹手术。与酒精消毒皮肤后,我们做了一个切口在白线,通过切口进入腹腔。发现肝脏后,我们将在揭露第一肝门肝叶。下,我们剪门静脉、肝动脉、胆总管microarterial夹块肝血流量。一旦发生肝缺血,肝脏叶的颜色将立即从深红色,浅红色。然后,我们把老鼠放在一个电热毯来维持他们的体温潮湿盐水纱布覆盖切口。后我们把夹子阻塞血液流动的45分钟,然后让血液回流到肝脏,肝脏再灌注过程完成。在最后一步,我们缝腹腔和这些老鼠放在电热毯(23,24]。

2.5。生化检测

我们收集了轨道血液样本的小鼠肝缺血和再灌注过程,然后从样品中提取血清离心法在4°C 2000×g 10分钟并存储在−80°C。制造商的指示协议后,我们使用了微型板块测试套件(奥林巴斯AU1000,奥林巴斯、东京、日本)检测血清ALT和AST水平和使用ELISA试剂盒测定血清il - 1的含量β和肿瘤坏死因子-α。

2.6。组织病理学评价

我们从腹部切除肝脏腔的老鼠,然后把肝脏组织在4%多聚甲醛为改造24小时。第二天,我们用不同浓度的乙醇脱水。之后,我们石蜡嵌入在组织和切成3片必威2490μ米厚。最后,我们染色切片苏木精和伊红())来观察损伤的程度。

2.7。免疫组织化学

我们把这些肝脏切片在60°C烘箱20分钟去除残留的蜡,然后制成冻干片与二甲苯和乙醇。之后,我们检索抗原通过加热片在95°C 10分钟,然后冷却到25°C。阻断内源性过氧化物酶活性是通过浸泡片在过氧化氢(H2O2)解决方案(3%)为20分钟37°C。为了避免产生高背景,我们用5%牛血清白蛋白阻止非特异性结合位点1 h。然后,一夜之间,肝脏切片被孵化与主要抗体bcl - 2(1: 500),伯灵顿(1:500),Beclin-1(1: 500),和LC3在4°C (1: 500)。在第二天早上,我们添加了片成二级债券主要抗体抗体可以专门为1 h和孵化37°C。抗体的功效绑定可以检测到diaminobenzidine工具包。最后,我们观察切片在光学显微镜下观察。

2.8。逆转录聚合酶链反应(rt - PCR)和定量实时PCR(存在)

所有肝组织rna被试剂盒提取试剂(热费希尔科学、沃尔瑟姆,妈,美国),然后反向转录成互补脱氧核糖核酸。我们执行中存在SYBR预混料交货Taq制造商的指导下指令检测mRNA水平7900 ht快速PCR系统(美国应用生物系统公司,培育城市,CA)。引物是β肌动蛋白,GGCTGTATTCCCCTCCATCG,扭转CCAGTTGGTAACAATGCCATGT;il - 1β、向前GAATGCCACCTTTTGACAGTG反向TGGATGCTCTCATCAGGACAG;il - 6, CTGCAAGAGACTTCCATCCAG,扭转AGTGGTATAGACAGGTCTGTTGG;肿瘤坏死因子-α、向前CAGGCGGTGCCTATGTCTC反向CGATCACCCCGAAGTTCAGTAG;bcl - 2,向前GCTACCGTCGTCGTGACTTCGC反向CCCCACCGAACTCAAAGAAGG;伯灵顿,AGACAGGGGCCTTTTTGCTAC,扭转AATTCGCCGGAGACACTCG;半胱天冬酶3前锋CTCGCTCTGGTACGGATGTG反向TCCCATAAATGACCCCTTCATCA;半胱天冬酶9日向前GGCTGTTAAACCCCTAGACCA反向TGACGGGTCCAGCTTCACTA;Beclin-1, ATGGAGGGGTCTAAGGCGTC,扭转TGGGCTGTGGTAAGTAATGGA;信用证、远期GACCGCTGTAAGGAGGTGC、反向AGAAGCCGAAGGTTTCTTGGG;,向前GAGGCACCCCGAAACATGG P62反向ACTTATAGCGAGTTCCCACCA。

2.9。免疫印迹分析

我们从肝组织提取蛋白质通过均质化radioimmunoprecipitation分析裂解缓冲(Kaiji生物学,南京,中国),phenylmethane-sulfonyl氟化物,蛋白酶抑制剂。由bicinchoninic酸测定蛋白质浓度的测定(Kaiji生物学)。执行电泳之前,我们煮的蛋白质样品在100°C 5分钟,然后用10%或12.5% sds - page分离蛋白质与蛋白质在电泳样品在120 V。接下来,我们选择了湿法转移到蛋白质转移到聚偏二氟乙烯膜(Hybond™;埃斯孔迪多、钙、美国)。一个小时之后,我们使用5%脱脂牛奶阻止非特异性结合位点至少1小时,然后孵化膜在一夜之间在4°C以下主要抗体:反β肌动蛋白(1:1000),anti-IL-6 (1: 500), anti-TNF -α(1:500),anti-Bcl-2 (1: 1000), anti-Bax (1: 1000), anti-caspase 3 (1: 500), anti-caspase 9 (1: 500), anti-Beclin-1 (1: 1000), anti-LC3 (1: 1000), anti-JAK2 (1: 1000), anti-STAT3(1: 1000),和anti-p-STAT3 (1: 1000)。在第二天早上,我们使用了0.1% Tween-contained PBST洗膜为三次,然后孵化与二级抗体膜1 h在37°C,和洗膜PBST三次。上述二次抗体可以anti-mouse或anti-rabbit抗体(1:2000)。最后,我们使用了一个奥德赛双色红外激光成像系统(美国东北Licor,林肯)观察显色结果。

2.10。统计分析

为了确保我们的研究的真实性,我们进行至少三次实验,提出了数据 。我们分析的数据和结果的血清ALT, AST,免疫印迹,ELISA,通过学生的存在进行了分析 - - - - - -测试或双向方差分析(事后Dunnett紧随其后的测试)。当 值小于0.05,我们认为统计上显著的结果。统计图都是由GraphPad棱镜8 (GraphPad软件公司,圣地亚哥,美国)。

3所示。结果

3.1。Pemafibrate和手术不会产生副作用在肝脏的结构和功能

为了确定模型和所造成的肝损伤只是pemafibrate是否肝毒素的,我们发现ALT和AST NC组的血样,虚假的组和pemafibrate(1.0毫克/公斤)组的老鼠。结果表明,无显著统计学差异AST和ALT(图的水平1(一))。与圆)染色法观察小鼠肝组织发现,肝脏组织的结构和功能在H&E-stained部分(图没有明显改变1 (b))。因此,我们相信pemafibrate的浓度和手术不影响肝功能。

(一)”name=
(一)
(b)”name=
(b)
图1
Pemafibrate没有毒性和副作用肝脏结构和功能。(一)所示的ALT和AST水平 由GraphPad棱镜8 ( ; )。在这三个组,在转氨酶表达两组之间无显著差异。(b))染色后,光学显微镜下观察肝脏(原始磁化,×200)。
3.2。Pemafibrate预处理可以减轻肝脏IRI

通过比较H&E-stained部分,ALT和AST水平骗局,IR,低剂量,中等剂量,和高剂量组,我们发现在三个时间点,IRI组的肝组织明显受损。然而,转氨酶水平pemafibrate预防组减少,和高浓度的pemafibrate减轻损害的效果优于低浓度,剂量依赖性(图2(一个))。光学显微镜的观察发现,虚假的组没有明显的损伤,但IRI组的肝组织结构变化,如膨胀、坏死和炎性细胞浸润。特别是在时间点8 h, IRI组的肝损伤更严重。然而,这些变化PEM-treated组的松了一口气。简而言之,这些实验结果再次证实了上述结论:血管结扎引起的肝损伤主要是代替外科手术。此外,圆)结果表明,pemafibrate可以减轻炎症损伤和坏死的IRI(图2 (b))。

(一)”name=
(一)
(b)”name=
(b)
图2
Pemafibrate可以显著减轻缺血再灌注后肝脏结构和功能的变化。(a)在三个时间点,IRI的转氨酶水平显著增加小鼠和改善治疗后,显示存在剂量依赖的相关性。ALT和AST水平表达的 。(b) H&E-stained肝部分光学显微镜下检查和×20放大成像。IRI组中,有大量的嗜酸性和无组织的坏死区域由绿线(圆圈)和增加炎症反应(黑色箭头)。然而,这一现象被PEM缓解。数据被 ( , # 虚假与IRI, IRI + PEM 0.1毫克/公斤与IRI,! IRI + PEM 0.1毫克/公斤与IRI + PEM 0.5毫克/公斤,和+ IRI + PEM 0.5毫克/公斤与IRI + PEM 1.0毫克/公斤;(一)双向方差分析;(b)的学生 - - - - - -测试)。
3.3。Pemafibrate抑制炎症

基于以上)染色结果,常见的炎症factors-IL-1的表达水平β、il - 6和TNF -α检测到。我们测试了肝组织中的表达水平ELISA(图3(一个)),发现在三个时间段,IRI组的表达水平显著高于虚假的组。然而,pemafibrate的干预下,炎症因子的水平减少剂量依赖性的方式。存在(图3 (b))和免疫印迹分析(数据3 (c)和3 (d)结果还表明,il - 1β和肿瘤坏死因子-α显著增加。和包含IHC表明,il - 1的水平β和肿瘤坏死因子-α低于IR组,显示一个下降的趋势(图3 (e))。这些结果表明,pemafibrate可以抑制炎性因子的释放,如il - 1β、il - 6和TNF -α。

(一)”name=
(一)
(b)”name=
(b)
(c)”name=
(c)
(d)”name=
(d)
(e)”name=
(e)
图3
PEM预处理抑制il - 1的生产β、il - 6和TNF -α在肝IRI。(一)血清il - 1β和肿瘤坏死因子-α水平衡量ELISA和作为 2,8,老鼠再灌注后24小时。(b)的相对mRNA水平的il - 1β、il - 6和TNF -α在每个小组进行评估,存在如图所示。(c, d) il - 1的蛋白表达β、il - 6和TNF -α通过免疫印迹检测。(e)免疫组织化学是用来检测TNF -α和il - 1β在肝组织中表达(原来的放大,×200)。分析了IOD总和Image-Pro +软件6.0。数据了 ( , # 虚假与IRI, IRI + PEM 0.1毫克/公斤与IRI,! IRI + PEM 0.1毫克/公斤与IRI + PEM 0.5毫克/公斤,和+ IRI + PEM 0.5毫克/公斤与IRI + PEM 1.0毫克/公斤;(a, b, d)双向方差分析;(e)的学生 - - - - - -测试)。表达水平的il - 1β肿瘤坏死因子-α,il - 6在IRI小鼠显著增加。PEM预处理水平显著下降,特别是在1.0毫克/公斤。
3.4。在HIRI Pemafibrate抑制程序性细胞死亡,包括细胞凋亡和自噬

HIRI有广泛的细胞程序性死亡(包括细胞凋亡和自噬。信使rna提取的实验结果中存在和观察分子的分布在肝组织切片发现与世行(图保持一致4(一))。我们选择bcl - 2、Bax、半胱天冬酶3和半胱天冬酶9 HIRI检测细胞凋亡的程度。免疫印迹结果显示,与IR组的水平相比,bcl - 2的程度有上升趋势,和程度的伯灵顿,半胱天冬酶3,半胱天冬酶9显著降低(数字4 (b)和4 (c))。另一种形式的细胞死亡在HIRI自噬。使用常见的自噬检测分子包括Beclin-1 LC3 P62,和免疫印迹观察每个分子的表达趋势不同干预条件下,我们发现P62在1.0毫克/公斤的表达高于0.01毫克/公斤,和Beclin-1 LC3表现出下降的趋势。IHC结果和前两个(图一样4 (d))。总之,pemafibrate可以减轻肝脏缺血再灌注损伤中细胞凋亡和自噬。

(一)”name=
(一)
(b)”name=
(b)
(c)”name=
(c)
(d)”name=
(d)
图4
PEM预处理改善细胞凋亡和自噬在肝IRI。(a)的相对mRNA水平bcl - 2、Bax、半胱天冬酶3,半胱天冬酶9日Beclin-1 LC3, P62。(b, c)蛋白表达的细胞凋亡,autophagy-related蛋白质。(d)免疫组织化学是用来检测bcl - 2、Bax, Beclin-1, LC3在肝组织中表达(原来的放大,×200)。IOD的和棕色区域总面积与Image-Pro + 6.0软件进行了分析。数据了 ( , # 虚假与IRI, IRI + PEM 0.1毫克/公斤与IRI,! IRI + PEM 0.1毫克/公斤与IRI + PEM 0.5毫克/公斤,和+ IRI + PEM 0.5毫克/公斤与IRI + PEM 1.0毫克/公斤;(a, c)双向方差分析;(d)的学生 - - - - - -测试)。IRI组P62和bcl - 2的表达明显低于NC组,而其他人则显著提高。PEM能扭转这一变化。
3.5。Pemafibrate保护肝脏通过调节JAK2 / STAT3β/ PPARα信号通路

我们测试了JAK2、Stat3和p-Stat3,发现JAK2 PEM-treated组的表达水平低于IRI集团和Stat3的水平α和Stat3β没有显著变化。p-Stat3的表情看到一个不同的趋势α和p-Stat3β,增加在p-Stat3水平相当α但在p-Stat3水平显著下降β,相比之下,IRI组。当pemafibrate充当PPARα受体激动剂、免疫印迹结果表明,不同浓度的作用下pemafibrate, PPAR的表达α在肝组织中顺序增加(数据5(一个)和5 (b))。这些结果,进一步验证了免疫组织化学实验(图5 (c)),表明pemafibrate可以抑制JAK2 / STAT3β/ PPARα信号通路。

(一)”name=
(一)
(b)”name=
(b)
(c)”name=
(c)
图5
PEM调节JAK2 / STAT3磷酸化β在肝IRI。PPAR (a, b)蛋白表达αJAK2, STAT3和p-STAT3。(c)的定量分析JAK2 / STAT3免疫印迹结果β/ PPARα。数据了 ( , # 虚假与IRI, IRI + PEM 0.1毫克/公斤与IRI,! IRI + PEM 0.1毫克/公斤与IRI + PEM 0.5毫克/公斤,和+ IRI + PEM 0.5毫克/公斤与IRI + PEM 1.0毫克/公斤;(b)双向方差分析;(c)的学生 - - - - - -测试)。PPAR的表达α和p-STAT3β明显增加,但JAK2看见一个急剧下降。

4所示。讨论

我们测量血清ALT和AST水平在1.0毫克/公斤PEM组,正常对照组和假组比较)染色后肝组织结构的变化,以确保药物剂量不损害肝脏。我们表明,1.0毫克/公斤PEM对肝脏没有明显的毒性作用。验证后药物对肝脏没有毒性作用,我们建立了肝IRI小鼠模型。结果表明,水平的IRI组都显著增加,但pemafibrate可以抑制这种变化。同时,肝坏死引起HIRI光显微镜下观察,和炎症细胞的积累提高PEM治疗后。

有许多HIRI的发生和发展机制,如ATP耗竭、内皮素(ET) /一氧化氮比例失衡,Ca2+过载,巨噬细胞激活(25]。在这个过程中,大量的活性氧释放,刺激免疫细胞的级联。免疫细胞是由枯氏细胞、自然杀伤细胞和树突细胞。激活巨噬细胞分泌大量炎症因子,如il - 1β、il - 6和TNFα(4,26,27]。基于之前的研究,我们发现il - 1的水平β、il - 6和TNF -α在肝组织和在显微镜下观察肝脏组织。大量的炎症细胞渗透,炎症因素显著增加,这意味着它证明了IRI后肝组织有结构变化。但pemafibrate可以在一定程度上减轻炎症和保护肝脏。

活性氧的释放可能会刺激自噬和凋亡在肝脏9,10]。我们确定Beclin-1 LC3以及P62(自噬标记)和bcl - 2家族以及半胱天冬酶家族qRT PCR(凋亡标记),世行,免疫组织化学(13,28]。我们发现PEM注入使受伤的肝脏产生更多P62和bcl - 2和减少Beclin-1 LC3,伯灵顿,半胱天冬酶和半胱天冬酶3。这些结果表明,PEM能缓解程序性细胞死亡。自噬是一个持续的细胞学行为。自噬的分子机制的研究中,大量的autophagy-related蛋白质逐渐被发现和相同的名称。这些ATG蛋白质发挥重要作用的启动自噬,自噬小体的生产29日,30.]。P62和LC3也自噬的关键蛋白。P62被认为是一个autophagy-specific衬底与LC3进入自噬体和自噬小体被溶酶体降解。Beclin-1 bcl - 2结合形成Beclin-1 / bcl - 2复杂[31日,32]。可以看出,自噬和凋亡紧密相关。线粒体在细胞凋亡的过程中,被认为是细胞凋亡调控的中心。bcl - 2和伯灵顿,作为重要成员,参与调节,释放阶段C,和招聘半胱天冬酶9 (33,34]。半胱天冬酶9属于apoptosis-initiating子类,但半胱天冬酶3属于凋亡效果子类(35,36]。换句话说,半胱天冬酶9位于上游的半胱天冬酶3和可以调节的蛋白质水平。

自从STAT3的表达水平α:STAT4β4:1,大多数研究忽视STAT3的角色β并把STAT3α作为研究STAT3 (33,34]。两亚型决定进一步了解这两种亚型的表达。在我们的实验中,与IRI组相比,JAK2和p-STAT3的水平α减少,而p-STAT3β显著增加,和STAT3没有变化。之间的显著差异的两个亚型p-STAT3表示,这两个相反的影响,和p-STAT3β对肝损伤有积极影响,这意味着上游刺激作用于JAK2然后刺激p-STAT3β,而不是STAT3β和STAT3α。这可能是与p-STAT3有关β:p-STAT3α异质二聚体和p-STAT3α:p-STAT3α为(34]。JAK2的减少导致p-STAT3的减少α和增加monomerized p-STAT3β。根据先前的研究,JAK2 / STAT3β在免疫反应中扮演一个重要的角色。IRI损伤引起的激活的巨噬细胞产生大量的炎症介质,如il - 1β、il - 6和TNF -α(37- - - - - -39]。这些炎症因子可以作用于肝细胞表面的受体,激活后JAK2进入细胞,使磷酸化STAT3β(40)(图6)。多以前的研究已经表明PPAR的激活αil - 6是由JAK2 / STAT3通路(41- - - - - -43]。


图6
枯氏细胞产生大量的炎症介质,可以与细胞膜受体结合,促进JAK2,抑制p-STAT3β和PPARα。一旦PPARα是抑制、bcl - 2减少和伯灵顿增加,这可能会刺激细胞凋亡和自噬。Pemafibrate可以抑制炎性因子的释放,减少后续反应。它可以保护肝脏免受过多的程序性细胞死亡增加p-STAT3的水平β和PPARα在肝IRI。

在自噬和凋亡[Pemafibrate也很重要44,45]。pemafibrate的机制仍不清楚,但对自噬抑制作用不是由西尔特(46]。作为一个PPARα受体激动剂,PEM可能激活ATG TEFEB,自噬过程的重要部分,抑制自噬(46- - - - - -49]。TEFEB还参与免疫反应和炎症反应50]。当PPARα淘汰,受体激动剂不能反向抑制自噬或诱导脂质退化和脂质吞噬作用[51]。PPARα结合RXR形成二聚体,调节目标基因。PPAR的抑制表达α会导致药物的凋亡效应减弱,失去了保护线粒体的52]。DOX-DNA复杂和DOX-TOP2β复杂的可以抑制PPAR的表达α,引起细胞凋亡,促进活性氧的释放。PEM也与炎症密切相关(53- - - - - -59]。心肌IRI会降低PPAR的水平α和ROS的分泌增加心肌60,61年]。后PPAR的表达α被抑制,老鼠更容易受到氧化应激。我们的实验结果也表明,PEM能缓解自噬和凋亡,bcl - 2这样的关键分子,伯灵顿,半胱天冬酶3,半胱天冬酶9日LC3, P62, Beclin-1都有相应的变化。此外,il - 1的水平β、il - 6和TNF -α玫瑰与PPAR的增加α。这些结果表明PEM的影响是存在剂量依赖的相关性,表明,抗炎,抗凋亡,antiautophagic影响三个剂量(0.1米/公斤,0.5毫克/公斤和1.0毫克/公斤)依次增加。

总之,我们的研究发现,HIRI刺激肝脏枯氏细胞释放大量炎症因子,结合进入肝细胞的细胞膜受体。这些炎症介质的分泌促进JAK2和STAT3磷酸化α和抑制STAT3磷酸化β。pemafibrate干预时,上述反应是逆转。水平的提高p-STAT3β激活PPARα,从而抑制细胞凋亡和自噬。在我们的研究有一定的局限性。例如,pemafibrate和JAK2 / STAT3之间的关系β仍然需要进一步研究。在临床治疗未知pemafibrate是否安全。其治疗效果需要在临床上较常用的药物。

5。结论

我们的研究发现,pemafibrate可以有效地抑制红外Balb / c小鼠的肝脏损害。在我们的实验中,pemafibrate显著降低血清ALT和AST水平和减轻肝脏病理生理变化。此外,pemafibrate抑制炎性因子的释放,包括il - 1β、il - 6和TNF -α等,以及细胞死亡的细胞凋亡和自噬通过调节JAK2 / STAT3β/ PPARα。总之,我们的研究表明,pemafibrate可能是一个潜在的治疗HIRI代理人。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

自弃程使得这项工作的主要贡献。

确认

这项工作得到了国家自然科学基金(批准号82002539)。

引用

  1. m . Jimenez-Castro m . Cornide-Petronio j . Gracia-Sancho和c·佩拉尔塔”Inflammasome-mediated肝脏缺血再灌注损伤的炎症。”细胞,8卷,不。10,1131年,页2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  2. t . tan和j . Heimbach”邪恶的东西来了,“肝脏病学,卷71,不。3、1119 - 1121年,2020页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  3. c .菅直人l . Ungelenk a . Lupp o . Dirsch和Dahmen,“缺血再灌注损伤在岁livers-the能量代谢、炎症反应、自噬,”移植,卷102,不。3、368 - 377年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  4. h·l . Lu, m .倪et al .,“先天免疫法规和肝脏缺血再灌注损伤,”移植,卷100,不。12日,第2610 - 2601页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  5. m . Donadon a·莫利纳里f . Corazzi et al .,“药理调制ischemic-reperfusion普林格尔机动肝手术期间的伤害。一个前瞻性随机试验研究”,世界日报的手术,40卷,不。9日,第2212 - 2202页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  6. k, s . Lee Zendejas, k . Behrns和j·金,“线粒体功能障碍和自噬在肝缺血/再灌注损伤,”生物医学研究的国际ID 183469条,卷。2015年,14页,2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  7. g . r . j . Li Li Lv, h·刘”的机制和策略从肝缺血再灌注损伤保护,”欧洲医学和药理科学审查,19卷,不。11日,第2047 - 2036页,2015年。视图:谷歌学术搜索
  8. p . Olthof r·范·Golen b·梅耶尔et al .,“热缺血时间变化在肝损伤,炎症,在肝缺血/再灌注损伤和功能,“疾病的分子基础,卷1863,不。2、375 - 385年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  9. h·李,j .太阳,g . Chen等人“鼠尾草酸纳米颗粒抑制肝脏缺血/再灌注损伤抑制ROS,还和NF -κB信号通路在老鼠。”生物医学和药物治疗= Biomedecine & Pharmacotherapie卷,82年,第246 - 237页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  10. m . Abu-Amara杨,n . Tapuria b·富勒b·戴维森和a . Seifalian“肝缺血/再灌注损伤:在炎症过程网络审查,”肝移植:官方出版的美国肝病研究协会和国际社会肝移植,16卷,不。9日,第1032 - 1016页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  11. a·c·Racanelli s . a . Kikkers a . m . k . Choi和s·m·科卢楠“自噬在慢性呼吸系统疾病和炎症,”自噬,14卷,不。2、221 - 232年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  12. n Ktistakis和美国Tooze消化扩大自噬机制”,细胞生物学的趋势,26卷,不。8,624 - 635年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  13. a . Chinnaiyan“apoptosome:细胞死亡机器的心脏和灵魂,”瘤形成,1卷,不。1,5 - 15,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  14. e .柴m . Shanmugam f . Arfuso et al .,“针对转录因子STAT3癌症预防和药物治疗”药理学和治疗卷,162年,第97 - 86页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  15. d·约翰逊,r·奥基夫和j .茅,“针对il - 6 / JAK / STAT3信号轴在癌症,”临床肿瘤学,15卷,不。4、234 - 248年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  16. j . t . Wang目前已经引进了费尔曼、h·李et al .,“JAK / STAT3-regulated脂肪酸β氧化对乳腺癌干细胞的自我更新和药物抗性至关重要,”细胞代谢,27卷,不。1,页136 - 150。e5, 2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  17. l . Avalle s Pensa g .瑞吉斯f•诺韦利诉波里,“STAT1和STAT3在肿瘤发生:一种平衡,”Jak-Stat,1卷,不。2、65 - 72年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  18. 诉Zoete、a . Grosdidier和o . Michielin“过氧物酶体proliferator-activated受体结构:配体特异性,分子开关和交互与监管机构,”Biochimica et Biophysica学报,卷1771,不。8,915 - 925年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  19. 诉钱德拉·黄y Hamuro et al .,”结构的完整PPAR -γrxr -α核受体复杂的DNA。”自然,卷456,不。7220年,第356 - 350页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  20. t .咚,j .律h . Imachi et al .,“选择性过氧物酶体proliferator-activated受体-α调制器k - 877调节腺苷的表达盒转运蛋白A1在胰腺β细胞,”欧洲药理学杂志卷,838年,第84 - 78页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  21. 郭k . Ogawa t .八木,t . et al .,“选择性PPAR Pemafibrateα调制器,并通过不同的PPAR非诺贝特抑制小胶质激活α和SIRT1-dependent通路。”生物化学和生物物理研究通信,卷524,不。2、385 - 391年,2020页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  22. 小川,s . Uehara y Tsunenari, h·卡瓦依h . Suemizu h .山崎,“预测循环的人类pemafibrate代谢物,小说antidyslipidemic药物,使用人性化的嵌合小鼠肝脏,”Xenobiotica;外国化合物在生物系统的命运,50卷,不。7,769 - 775年,2020页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  23. j .冯张,w . Mo et al .,“红景天甙预处理变弱肝缺血再灌注损伤中细胞凋亡和自噬通过抑制增殖作用蛋白激酶途径在老鼠身上,“药物设计、发展和治疗卷卷11日,第2006 - 1989页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  24. j . j .霁l . Wu冯et al .,“咖啡醇预处理变弱肝缺血再灌注损伤中细胞凋亡和自噬通过抑制ERK / PPARγ途径。”国际免疫药理学第106529条,卷。84年,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  25. 曾y .问:张:叮,y . f . et al .,“角色的新进展一氧化氮在肝缺血再灌注损伤,”世界胃肠病学杂志》上,23卷,不。14日,第2510 - 2505页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  26. 周董,y, w . Wang et al .,“维生素D受体激活肝巨噬细胞改善肝脏炎症,脂肪变性,和胰岛素抵抗在老鼠身上,“肝脏病学,卷71,不。5,1559 - 1574年,2020页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  27. x Du, m, d, j .周l . Wang, l·詹MicroRNA-21有助于LPS-Induced脓毒症小鼠急性肝损伤的抑制PPARα表情,“PPAR研究卷,2020篇文章ID 6633022, 7页,2020。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  28. 问:夏,m .徐张平,l . Liu孟x,和l .侗族“自噬与磷酸肌醇治疗胶质母细胞瘤的治疗潜力3-kinase /蛋白激酶B /哺乳动物雷帕霉素靶信号通路抑制剂,”在肿瘤领域第572904条,卷。10日,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  29. 铃木h . Nakatogawa k . y . Kamada, y Ohsumi,“动态和自噬机制的多样性:酵母,教训”自然评论分子细胞生物学,10卷,不。7,458 - 467年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  30. 大泽生,铃木h . t . y . Fujioka,野田佳彦,”结构生物学的核心自噬机制”,当前结构生物学的观点卷,43 - 17,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  31. l . j . Chipuk Bouchier-Hayes, d .绿色“线粒体外膜透化作用在细胞凋亡:无辜的旁观者的场景中,“分化,13卷,不。8,1396 - 1402年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  32. d . Acehan x江d·摩根,j·休斯,x,和c·阿奇,“apoptosome的三维结构:影响装配,procaspase-9绑定,并激活,“分子细胞,9卷,不。2、423 - 432年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  33. Marzo, c·布伦纳:Zamzami et al .,“渗透过渡孔复杂:细胞凋亡调控的目标还存在和bcl-2-related蛋白质,”《实验医学杂志》上,卷187,不。8,1261 - 1271年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  34. b . Gajkowska美国Wojewodzka, j . Gajda“易位的伯灵顿和线粒体,内质网和核膜:在细胞凋亡可能的控制点,”《分子组织学,35卷,不。1,11-19,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  35. j·亚当斯,“死亡的方式:多个细胞凋亡通路,”基因与发展,17卷,不。20日,第2495 - 2481页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  36. y史,“apoptosome装配的机械方面,”当前细胞生物学的观点,18卷,不。6,677 - 684年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  37. s . Pullamsetti w·西格,r .岛上,“古典il - 6信号:一个有前途的治疗肺动脉的目标高血压”,临床研究杂志,卷128,不。5,1720 - 1723年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  38. y (c . Phan l .你et al .,“异位upregulation膜结合IL6R驱动器在肺动脉血管重建高血压”,临床研究杂志,卷128,不。5,1956 - 1970年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  39. r·波林,j . Meloche和阀盖,“STAT3信号在肺动脉高血压,”Jak-Stat,1卷,不。4、223 - 233年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  40. j·奥谢,d . Schwartz, a . Villarino m . Gadina麦克因尼斯,和a·劳伦斯“JAK-STAT通路:影响人类疾病和治疗干预,”年度回顾医学,卷66,不。1,第328 - 311页,2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  41. g .咀嚼迈尔斯,a钱煦教授,t·默罕默德“白细胞介素- 6抑制过氧物酶体proliferator-activated受体α表达是由JAK2 - PI3K-induced STAT1/3 HepG2的肝细胞细胞,”分子和细胞生物化学,卷388,不。1 - 2,25-37,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  42. 问:郭、g . Wang和s . Namura“非诺贝特改善脑血流量在老鼠大脑中动脉闭塞后,“脑血流量和新陈代谢杂志:官方杂志的国际社会脑血流量和新陈代谢,30卷,不。1,第78 - 70页,2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  43. g . Sugga r . Khanam和m .汗”保护作用的一类在心肌缺血/再灌注,”先进的制药技术与研究杂志》上,3卷,不。3、188 - 192年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  44. n . Fujita k . Sase c .原慎司Arizono,高木涉,h . y . Kitaoka,“Pemafibrate防止视网膜神经细胞死亡在NMDA-induced会通过抑制p-c-Jun表情,“分子生物学报告,48卷,不。1,第202 - 195页,2021。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  45. 纳塔尔j .对于鸟群集体a, m . Rombaut et al .,“人类肝脏体外模型揭示不同anti-NASH效能的PPAR激动剂”细胞生物学和毒理学,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  46. c . Settembre r . de Cegli g . Mansueto et al .,“TFEB控制细胞脂质代谢通过starvation-induced自身调节的循环,”自然细胞生物学,15卷,不。6,647 - 658年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  47. 罗x l .钟,l . Yu et al .,“TRIB3造成肿瘤抑制PPARα表达式通过ubiquitin-mediated蛋白酶体降解在急性髓系白血病”生命科学第118021条,卷。257年,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  48. h . y . Kim Lee PPAR - j·金et al。。α激活介导的宿主防御通过感应TFEB和脂质代谢,”免疫学杂志,卷198,不。8,3283 - 3295年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  49. a . Ghosh m . Jana k·莫迪et al .,“过氧物酶体激活Proliferator-activated受体α引发大脑细胞中溶酶体生物起源:”,《生物化学》杂志上,卷290,不。16,10309 - 10324年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  50. o .运价指数n . Ihuegbu美国标签et al .,“天生的宿主防御需要TFEB-mediated cytoprotective和抗菌基因的转录,”免疫力,40卷,不。6,896 - 909年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  51. 肖j . m . Lee m .瓦格纳r . et al .,“Nutrient-sensing核受体协调自噬,”自然,卷516,不。7529年,第115 - 112页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  52. 问:方舟子,w . Wang z, d . Wang l .吴PPAR和y王。α改善doxorubicin-induced毒性减少通过调节MEOX1 mitochondria-dependent凋亡,”在药理学领域第528267条,卷。11日,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  53. n . Hennuyer Duplan, c . Paquet et al .,“这部小说选择性PPARα调制器(SPPARMα)pemafibrate改善血脂异常,提高反向胆固醇运输,减少炎症和动脉粥样硬化,”动脉粥样硬化卷,249年,第208 - 200页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  54. h . Konishi k . Miyauchi Onishi et al ., a“pemafibrate效果(k - 877),一种新的选择性过氧物酶体proliferator-activated受体α模块化(SPPARMα使用低密度脂蛋白受体),在动脉粥样硬化模型淘汰赛猪球囊损伤,”《公共科学图书馆•综合》,15卷,不。11篇文章e0241195 2020。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  55. 田中y佐佐木,m .旭山t . et al .,“选择性PPAR Pemafibrateα调制器,防止非酒精性脂肪肝发展没有减少肝脏甘油三酯含量,”科学报告,10卷,不。1,p。7818年,2020。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  56. r . Mansouri e·博热粗厚呢,b . Staels和p . Gervois“系统性和远端影响肝脏特异性过氧物酶体proliferator-activated受体-α控制急性期反应,”内分泌学,卷149,不。6,3215 - 3223年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  57. s . Standage c·考德威尔,b . Zingarelli和h . Wong“减过氧物酶体proliferator-activated受体α表达与降低生存和增加组织细菌负荷在脓毒症,”冲击,37卷,不。2、164 - 169年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  58. k . Drosatos z Drosatos-Tampakaki r .汗et al .,“抑制c-Jun-N-terminal激酶增加心脏过氧物酶体Proliferator-activated受体α表达和脂肪酸氧化,防止Lipopolysaccharide-induced心脏功能障碍 ,,”《生物化学》杂志上,卷286,不。42岁,36331 - 36339年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  59. f .佩纳g .墨金·m·维拉et al .,“治疗_in vitro_ PPARα和PPARγ配体驱动M1-to-M2极化_T的巨噬细胞。cruzi_来华的老鼠。”Biochimica et Biophysica学报,卷1852,不。5,893 - 904年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  60. h . Vosper g . Khoudoli t·格雷厄姆和c·帕尔默,“过氧物酶体proliferator-activated受体受体激动剂,hyperlipidaemia,动脉粥样硬化,”药理学和治疗,卷95,不。1,47 - 62、2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  61. e·罗宾逊和d .悲伤”的意义过氧物酶体proliferator-activated受体在心血管系统健康和疾病,”药理学和治疗,卷122,不。3、246 - 263年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

betway赞助版权©2021自弃Cheng和Chuanyong郭。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。

更多相关文章

PDF 下载引用 引用
下载其他格式更多的
ePub
XML
订单打印副本订单
的观点149年
下载248年
引用

相关文章

文章奖:2020年杰出的研究贡献,选择由我们的首席编辑。获奖的文章阅读。