研究文章|开放获取
Isuru Anupama Dharmasena, Deepani Siriwardhana, Anoja Priyadarshani Attanayake, "斯里兰卡健康成人血浆葡萄糖浓度的样本量变化和分析延迟的影响",Scientifica, 卷。2021, 文章的ID6061206, 5 页面, 2021. https://doi.org/10.1155/2021/6061206
斯里兰卡健康成人血浆葡萄糖浓度的样本量变化和分析延迟的影响
摘要
分析前正确的样品体积和储存时间是估计患者血糖浓度的重要考虑因素。本研究旨在确定健康成人血浆葡萄糖结果分析中样本量变化和时间延迟的影响。共有30名年龄在20到30岁之间的人被选为研究对象。血液样本分别被收集到三个氟-草酸盐收集管中。结果表明,从2.0 mL的草酸氟管到1.0 mL和3.0 mL的样品体积变化对血糖浓度无显著影响(> 0.05)。然而,在延迟分析后,样品中的血浆葡萄糖浓度显著降低。采集1小时后分析的平均空腹血糖浓度与采集3小时后分析的平均空腹血糖浓度无显著差异(> 0.05)。采集后1小时至5小时时间点的平均空腹血糖浓度(< 0.001)和收集后3小时至5小时(= 0.014)差异显著。综上所述,过充和过充(2.0±1.0 mL)的草酸氟管对血糖结果无显著影响。如果在收集后的3小时内分析样本,时间相关的变化也不具有统计学意义。
1.简介
糖尿病是一种以高血糖为主要特征的非传染性代谢性疾病。目前,它已成为世界和斯里兰卡共同的公共卫生问题。2014年,糖尿病患者估计约为4.22亿[1].国际糖尿病联合会预测,到2040年,糖尿病将影响全球6.42亿人[1].根据世界卫生组织最近发布的报告,2016年斯里兰卡与糖尿病相关的死亡人数为10130人(占总死亡人数的7%)[2].因此,糖尿病的早期诊断对于控制其严重程度和预防其相关并发症的发生是非常重要的。
目前,血糖是临床实验室中最常见的诊断检测手段之一[3.].在化学病理实验室的总工作量中,30%-40%与葡萄糖浓度的估计有关[4].虽然糖化血红蛋白和血糖检测都被提倡用于糖尿病的诊断,但在斯里兰卡,最常用的主要实验室检测仍是空腹血糖。此外,实验室还收到随机血糖、餐后血糖和口服葡萄糖耐量测试的请求。血浆葡萄糖分析使用半自动或全自动分析仪,或基于给定实验室的可用设备分光光度法。葡萄糖氧化酶-过氧化物酶和己糖激酶是这些平台中葡萄糖分析常用的酶法[5- - - - - -7].
一般情况下,血液被收集到带有抗糖酵解剂的抗凝管中,用于估计血糖。目前的组合包括氟化钠/草酸钾、缓冲柠檬酸钠,以及氟化钠/草酸钾或柠檬酸钠与EDTA的组合,用于估计血浆葡萄糖水平[8].虽然可以通过将血液收集到普通管中来测量血糖,但研究已经证明,由于血浆中含水量较低,血浆中的葡萄糖浓度高于血清[3.].为了在血糖结果的估计中获得准确的值,最好使用含管的粉末状抗凝剂,以防止液体抗凝剂对血液的稀释作用。文献显示,100µL的液体氟化钠-草酸钾混合于2.7 mL血液可稀释3.7% [9].
然而,在样品采集过程中,最关键的是在采集管中抑制体外糖酵解。在斯里兰卡的临床实践中,氟化钠/草酸钾管被用作估计葡萄糖浓度的收集管。氟与无机磷酸盐结合形成氟磷酸盐,氟磷酸盐在烯醇化酶存在时与镁离子结合[3.].然后,它抑制烯醇化酶的作用,从而抑制糖酵解的后期步骤。结果,血糖水平稳定下来。虽然氟是一种抑制剂,但对体外糖酵解的抑制作用并不立即起作用[10].当样品在室温下保存1小时时,根据先前的观察,每小时葡萄糖会减少5%-7% [11].
根据抗凝血剂的用量,有一个推荐的血量可以填入管中。氟化物与血液的比例为2毫克/毫升。草酸盐与血液的比例可在1-2毫克/毫升之内。不正确的样品体积是样品接受或拒绝标准中的重要参数[12].在斯里兰卡的医院中,在估计血糖水平时,管内充盈不足比管内充盈过多更为常见。这是由于与患者静脉穿刺困难或抽血不足相关的问题,如果必须进行多次测试。如果改变推荐的体积,糖酵解抑制可能不是最佳的。因此,保持正确的血与抗凝剂体积比对准确估计血糖至关重要。
此外,在血糖估计中,周转时间也是一个重要的考虑因素。血浆与血液细胞部分的长时间接触,由于红细胞、白细胞和血小板的利用,导致血浆葡萄糖水平降低。根据本地采用的标准操作程序,应在收集样本后两小时内进行血浆葡萄糖估计,并应在收集样本后一小时内进行样品制备(将血浆与细胞分离)以供分析[13].在卫星采集中心采集样品时,很难在1小时内运输和制备样品用于分析。我们在此确定了健康成人血浆葡萄糖结果分析中样本量变化和时间延迟的影响。
2.材料和方法
分别使用Sigma 2-5离心机(Sigma Laborzentrifugen GmbH, Osterode am Harz, Germany), Vision KMC-1300V旋涡混合物(Vision Scientific, kigido, Korea)和Shimadzu UV-1800分光光度计(Shimadzu Corporation, Japan)用于样品制备和吸光度测量。
山东成武(中国)市售草酸氟收集管(首选制造商的容量−2.0 mL)用于收集参与者的血液。
2.1.研究协议
在禁食8-10小时后,采集30名参与者(15名健康男性和15名健康女性)的血液,年龄在20 - 30岁之间。任何服用任何药物、静脉通路困难或诊断为糖尿病的个体都被排除在研究之外。所有血液样本均在征得书面同意后采集。抽血是由训练有素的护理人员按照标准操作程序进行的。
2.2.道德的考虑
获得了斯里兰卡鲁胡纳大学联合健康科学学院伦理审查委员会的伦理批准(参考编号:14.02.2018:013)。
每个参与者在采血前禁食8-10小时。每个人抽取6.5 mL血液,分别注入1.0 mL、2.0 mL和3.0 mL的草酸氟收集管中。将样品轻轻混合。在收集40-50分钟内,样品以3000转/分离心5分钟以获得血浆,并在每个时间点从管中取出样品用于葡萄糖分析。在采集1小时、3小时和5小时后,根据葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法,使用市售分光光度酶测定试剂盒(Biorex Diagnostics, UK)估计空腹血糖浓度[14].每天运行两个级别的内部制备的质量控制样品(正常和高),以检查结果的精确度。
容积为十微升(10µL)的血浆样品或标准品与1.0 mL葡萄糖试剂混合,37°C孵育5分钟。用分光光度计在500 nm处测量每个样品的吸光度。测定血浆葡萄糖浓度。
2.3.统计分析
使用适当的统计检验对数据进行分析;均值比较采用方差分析(ANOVA),然后采用Tukey HSD进行多重比较。的值< 0.05为差异有统计学意义。对假设进行了方差分析验证p值和Tuckey HSD是有效的(补充材料,图1- - - - - -3.).采用IBM SPSS version 20软件进行数据分析。
3.结果
分析阶段定义为“1小时,1.0 mL;1小时,2.0 mL;1小时,3.0 mL;3小时,1.0 mL;3小时,2.0 mL;3小时,3.0 mL;5小时,1.0 mL;5小时,2.0 mL;5小时,3.0 mL。”各阶段平均血糖值在0.05的显著水平上相互比较。 The mean plasma glucose concentration in different phases in analysis is mentioned in Table1.
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
数值用平均值±标准差表示。 |
每个分析阶段的平均值差异百分比汇总如图所示1.
本研究结果显示,同一分析时间不同体积组间差异无统计学意义(= 0.535)和在分析时间和样品体积(时间卷)(= 0.818)。然而,当考虑在固定体积下的样品分析时间时,分析之间的差异有统计学意义(< 0.05)。
采集1小时后分析的平均空腹血糖浓度与采集3小时后分析的平均空腹血糖浓度无显著差异(> 0.05)。采集后1小时至5小时时间点的平均空腹血糖浓度(< 0.001)和收集后3小时至5小时(< 0.001)差异显著(表2).
|
||||||||||||||
数值用平均值±标准差表示。一个采集1小时后分析的平均空腹血糖浓度与采集3小时后分析的平均空腹血糖浓度无统计学差异(> 0.05)。b采集1小时后分析的平均空腹血糖浓度与采集5小时后分析的平均空腹血糖浓度差异有统计学意义(< 0.001)和收集后3小时和5小时分析之间(< 0.001)。 |
4.讨论
本研究旨在确定在健康成人血浆葡萄糖浓度分析中样本容量变化与时间延迟的影响。我们的结果显示,当血液被收集到氟草酸盐管时,单从1毫升到3毫升的样品体积变化不会导致测量的血浆葡萄糖浓度有统计学上的显著差异。然而,当考虑恒定的样本量时,葡萄糖浓度在1 - 5小时和3 - 5小时的时间点之间有统计学上的显著变化。
影响血浆葡萄糖结果可靠性的分析前因素最近进行了综述[1].试管的类型和分析时间是关键考虑因素,因为血液收集,这两者都与葡萄糖的稳定性有关。关于用最好的添加剂来减少糖酵解的试管的争论仍然没有解决。在找到更多基于证据的替代品之前,Pasqualetti等人[1]建议使用含氟草酸盐管采集血浆葡萄糖。氟草酸盐管是当地最常用的管;因此,我们评估了样本量和时间延迟对葡萄糖稳定性的影响。在我们的研究中,参考样品是填充到最佳体积(2ml)的试管,并在1小时内进行分析。因此,我们没有评估采集后第一个小时内葡萄糖浓度的变化,这是我们研究的一个局限性。Dimeski等人[8]表明,与0小时相比,1小时、2小时和4小时葡萄糖浓度分别有5.4%、7%和8.5%的变化。我们的研究显示,与参考样本(2 mL, 1小时)相比,收集后3小时和5小时的变化分别为3.5%和6.7%。我们的研究人群由健康的受试者组成。除了作为一种诊断测试,空腹血糖还被用于评估当地2型糖尿病患者的血糖控制。因此,评估容量和时间延迟对糖尿病患者血糖检测的影响是有必要的,但本研究尚未对其进行评估。
我们研究的新奇之处在于评估体积变化对葡萄糖稳定性的影响。由于1-3 mL的样品量之间没有明显的统计学差异,因此仅基于样品量的排样做法需要重新评估,以确定是否有临床显著变化。有时,即使从医院的病房和诊所运输样本也会出现无意的延误。当样本从采集中心到主实验室时,这个问题就更严重了。基于样本体积变化的不必要的排斥反应将延误诊断并给患者和临床医生带来不便。因此,我们建议在血糖分析中更明智地应用与样本量相关的验收拒绝标准。
大多数研究已经证明氟化钠在样品收集2-4小时内是无效的抗糖酵解剂[8,10,11].然而,在一个小时内采集、运输和分析样品实际上是很困难的。为了尽量减少延迟运输对血浆葡萄糖估计的影响,可以提出以下建议,即在实验室收集样本,在从细胞部分收集血浆后立即分离血浆,并在找到更多关于其他抗糖酵解剂(如柠檬酸盐)的可靠证据之前在冷容器中运输。在无法将血浆从细胞中分离的设施中,在收集后不久,如果至少在收集后3小时内进行血糖分析,根据我们的研究发现,血糖结果的变化将较少。
5.结论
过充和过充(2.0±1.0 mL)的草酸氟管对血糖结果无显著影响。如果样本在收集后的3小时内进行分析,时间依赖性的变化在统计上也不显著。
数据可用性
支持本研究结果的平均值包含在文章中,原始数据可向通讯作者索取。
的利益冲突
作者声明他们没有利益冲突。
致谢
作者要感谢鲁胡纳大学农学院作物科学系D.A.B.N. Gunaratna博士在统计数据分析方面提供的指导,以及联合卫生科学学院医学实验室科学系的学术和非学术人员提供的实验室设施和技术援助。他们还要感谢斯里兰卡鲁哈纳大学联合卫生科学学院提供的财政援助。
补充材料
对假设进行了方差分析验证p值和Tuckey HSD是否有效。数字1.血糖浓度残差与葡萄糖浓度预测值的散点图。散点图中没有任何特定的模式。在任何水平上方差相等(假设1)。所有上述异方差检验的显著性为> 0.05。因此,对于任何变量(分析时间,样品体积和样品体积分析时间),方差在任何水平上是相等的。图2。血糖浓度残留的Q-Q图。图3。血糖浓度残差趋势正常Q-Q图。根据图2和图3,残差呈正态分布(假设2)。(补充材料)
参考文献
- S. Pasqualetti, F. Braga和M. Panteghini,“影响血糖结果临床可靠性的分析前和分析方面”,临床生物化学,第50卷,no。10-11, pp. 605-611, 2017。视图:出版商的网站|谷歌学者
- 世界卫生组织,“斯里兰卡糖尿病国家概况”,世界卫生组织,瑞士日内瓦,2016年,http://www.searo.who.int/srilanka/lka_en.pdf?ua=1.视图:谷歌学者
- K. Pippitt, M. Li和H. E. Gurgle,《糖尿病:筛查和诊断》,《糖尿病:筛查和诊断》美国家庭医生,第93卷,no。2, pp. 103-109, 2016。视图:谷歌学者
- N. Nikolac,“分析前因素对葡萄糖浓度测量的影响”,Biochemia》第24卷第4期。1, pp. 41-44, 2014。视图:谷歌学者
- V. N. Ambade, Y. V. Sharma和B. L. Somani,“估计血糖的方法:比较评价”,印度武装部队医学杂志第54卷第4期。2, pp. 131-133, 2017。视图:出版商的网站|谷歌学者
- L. M. Dickson, E. J. Buchmann, C. J. V. Rensburg和S. A. Norris,“葡萄糖氧化酶和己糖激酶方法之间血糖差异对估计妊娠期糖尿病患病率的影响”,科学报告, 2019年第9卷。视图:出版商的网站|谷歌学者
- K. Ayyanar, S. Pichandi和P. Janakiraman,“葡萄糖氧化酶和己糖激酶方法的评价”,国际生物技术与生物化学杂志第14卷第4期。1, 2018年第51-58页。视图:谷歌学者
- G. Dimeski, K. S. Yow和N. N. Brown,“什么是最适合的血糖估计的血液收集管?”临床生物化学年鉴第52卷,no。2, pp. 270-275, 2015。视图:出版商的网站|谷歌学者
- W. S. Waring, L. E. Evans和C. T. Kirkpatrick,“糖酵解抑制剂对血糖测量的负偏倚:对糖尿病患病率的潜在影响,”临床病理学杂志第60卷,no。7,页820-823,2007。视图:出版商的网站|谷歌学者
- R. Gambino和D. E. Bruns,“血液样本中葡萄糖的稳定:旧的去,新的去,”临床化学与检验医学“,,第51卷,no。10, pp. 1883-1885, 2013。视图:出版商的网站|谷歌学者
- M. Turchiano, C. Nguyen, A. Fierman, M. Lifshitz,和A. Convit,“社区外联研究中血液样本采集和处理方法对血糖水平的影响”,环境与公共卫生杂志, vol. 2013, Article ID 256151, 4页,2013。视图:出版商的网站|谷歌学者
- P. Carraro, T. Zago和M. Plebani,“探索测试过程的初始步骤:前前分析错误的频率和性质”,临床化学第58卷第1期。3, pp. 638-642, 2012。视图:出版商的网站|谷歌学者
- A. S. Kanagasabapathy和S. Kumari,临床化学标准操作规程指南,第15卷,世界卫生组织,印度新德里,2000年。
- P. Trinder,“使用含有非致癌显色剂的氧化酶-过氧化物酶系统测定血糖,”临床病理学杂志,第22卷,no。2,第158-161页,1969年。视图:出版商的网站|谷歌学者
betway赞助
betway赞助版权所有©2021 Isuru Anupama Dharmasena等人。这是一篇开放获取的文章创作共用授权协议该法律允许在任何媒体上不受限制地使用、分发和复制,前提是必须正确引用原著。