国际兽医医学

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国际兽医医学/2021/文章

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体积 2021 |文章的ID 8818308 | https://doi.org/10.1155/2021/8818308

A. Akhtar, M. Hair-Bejo, Elawad A. Hussein, z安盟Zakaria 不同的失活沙门氏菌enteriditis鸡体内噬菌体类型及灭活产品的安全性和有效性”,国际兽医医学 卷。2021 文章的ID8818308 15 页面 2021 https://doi.org/10.1155/2021/8818308

不同的失活沙门氏菌enteriditis鸡体内噬菌体类型及灭活产品的安全性和有效性

学术编辑器:安东尼奥Ortega-Pacheco
收到了 2020年5月5日
修改后的 2021年3月20日
接受 2021年4月1日
发表 2021年4月13日

摘要

这项研究是为了灭活沙门氏菌enteriditis检测噬菌体类型,并确定灭活的噬菌体在鸡体内的安全性和有效性。SE pt 1、3A、6A、7和35灭活后接种(0.20 mL) 124只鸡,分为6组(CV1、CV3A、CV6A、CV7、CV35和CV0为对照组)。接种后第14天取样(pi)。第14天,每组8只鸡进行口服灌胃,灌胃剂量为0.20 mL/只(1010cfu/mL) SE pt 6A和指定的CV1C、cvv3ac、CV6AC、CV7C、CV35C和CV0C作为对照鸡。在攻毒后第7和14天,每组取4只鸡进行采样。各组间体重差异无统计学意义。在挑战组,不同的组织和隔离之间没有显著的联系沙门氏菌第7天和第14天。这是有意义的(p< 0.05)沙门氏菌c0c组与其他挑战组比较。在不同的组织之间没有观察到显著性的诱导微观变化。在第7天和第14天之间,诱导的病变评分没有观察到显著性。同时记录临床体征和大体病变。ELISA检测。仅CV3AC组在第14天平均抗体滴度为1359。结果表明,灭活的sept 3A和6A对血吸虫病具有安全有效的保护作用沙门氏菌enteriditis鸡的感染。

1.简介

人类感染沙门氏菌血清被认为是全世界的主要疾病负担。沙门氏菌血清是一个普遍存在的物种,包括2600多个不同的serovars。这些病可分为伤寒病和非伤寒病沙门氏菌(新界南)serovars [1].然而,禽类产品作为载体沙门氏菌,在将微生物传播给人类和动物中起着重要作用,最终造成巨大的经济损失。在欧盟成员国和美国,有记录表明发生鸡传播沙门氏菌病人类在15.7%至85.0%之间[2].

在农场采取控制措施,以限制鸡蛋受到污染沙门氏菌,包括严格的农场生物安全及常规的化学除污[3.],而防止宿主胃肠道定殖的方法包括在饲料和水中添加有机酸、使用益生菌和竞争性排除产品以及接种疫苗[3.].接种疫苗和其他控制措施是减少麻疹的一项重要战略沙门氏菌感染,从而减低经由食物传染人类疾病的风险[4].

许多类型的疫苗已被开发用于预防沙门氏菌感染,如引起细胞介导和体液免疫反应的减毒活疫苗,但问题仍然存在[4].灭活疫苗可以为鸡提供抑制的免疫力沙门氏菌在器官内定植及减少粪便中微生物的脱落[5].因为灭活疫苗构成了一种众所周知的有效疫苗,灭活疫苗沙门氏菌enteriditis将大大有助于疫苗的开发,以控制马来西亚分离沙门氏菌enteriditis.研究的目的是使不同的动物失活沙门氏菌enteriditis在马来西亚分离的噬菌体类型,并确定灭活单株的安全性和有效性沙门氏菌enteriditisSPF鸡的噬菌体类型。

2.材料与方法

所有实验程序均按照马来西亚普特拉大学动物伦理研究政策进行。

2.1.灭活菌的发展沙门氏菌enteriditis噬菌体类型

沙门氏菌enteriditis鉴定出1、3A、6A、7、35株噬菌体,在生物反应器中繁殖、发酵,然后用福尔马林分别灭活。

2.2.沙门氏菌enteriditis噬菌体类型分离

沙门氏菌enteriditis噬菌体6A型(UPM-0527),沙门氏菌enteriditis噬菌体7型(UPM-0530),和沙门氏菌enteriditis35型噬菌体(UPM-0525)从马来西亚柔佛州的一些商业肉鸡肝脏样本中分离得到沙门氏菌enteriditis从粪便样本中分离到3A型噬菌体(UPM-0541)沙门氏菌enteriditis1型噬菌体(UPM-05)从马来西亚马六甲市肉鸡肝脏样本中分离得到。所有沙门氏菌enteriditis2005年分离出噬菌体类型,然后在英国伦敦Colindate大道感染中心肠道病原体实验室进行鉴定。

2.3.候选人的确认沙门氏菌enteriditis噬菌体类型

沙门氏菌enteriditis将1、3A、6A、7和35型噬菌体培养于原液血琼脂上,37°C孵育24小时。从血琼脂中取一环细菌培养到木糖赖氨酸脱氧胆酸(XLD)和BGA上,37℃孵育24小时。怀疑沙门氏菌菌落培养在三糖铁(TSI)和尿素斜体上进行生化试验。疑似菌落也用于革兰氏染色。沙门氏菌经聚o玻片凝集试验证实。

2.4.候选菌株发酵沙门氏菌enteriditis噬菌体类型

分别对5种噬菌体类型进行发酵沙门氏菌enteriditis.已确认沙门氏菌菌落培养于20 mL的Triptic soy Broth (TSB)中,37°C孵育24小时。将培养物转移到4升(L)的(TSB)中,在37°C下培养18小时。然后,最终转移到清洗和灭菌的50 L容量的生物反应器(搅拌槽反应器系统S. 218/D50 Biostat D, B. Braun生物技术国际公司),有40 L TSB在100转,37℃,pH为7。按照标准程序,发酵20小时。对发酵过程进行了连续监测。收获的果实被收集到两个消过毒的塑料桶里。发酵后立即加入0.7%的甲醛灭活产量,人工摇匀混合。每次发酵时都要清洗生物反应器沙门氏菌enteriditis噬菌体类型。

2.5.生长曲线的确定

发酵过程中,每2小时从发酵培养基中取20 mL无菌玻璃瓶中取样。通过连续稀释(10−1, 10−2, 10−3,…,10−10)和盘子数。然后从发酵培养的0.5 mL转移到一个装有4.50 mL稀释剂(TSB)的玻璃瓶中,制成10−1.接下来,将0.5 mL稀释的培养基转移到第二个装有4.50 mL稀释剂(TSB)的玻璃瓶中,使10−2稀释等等;这种方法重复了10次。因此,连续稀释到10−10进行了。对于菌落形成单位/平板计数,最后3次稀释0.1 mL (10−8, 10−9,及10−10)在两个不同的培养皿中涂抹XLD,在37°C下孵育24小时。两个培养皿,不培养,培养作为对照。

2.6.失活的沙门氏菌

在细菌培养液中加入37%的甲醛,直至最终浓度为0.7%,从而使细菌失活。分别在产量中加入37%的甲醛沙门氏菌enteriditis噬菌体类型发酵后,人工摇匀,室温保存24小时。

2.7.福尔马林含量的测定沙门氏菌失活

测定了用于细菌灭活的福尔马林浓度沙门氏菌enteriditis噬菌体1型和沙门氏菌enteriditis噬菌体6A型之前进行不同的失活沙门氏菌enteriditis噬菌体类型。不同浓度的福尔马林,从0.1%,0.2%,0.3%等,0.9%的细菌被测试失活。TSB培养体含有1011细菌培养(cfu)/mL (1010cfu/0.1 mL)细菌和37%甲醛。通过比较细菌培养浊度与麦克法兰管浊度,按麦克法兰法制备细菌培养物。福尔马林被一滴一滴地加入到细菌培养物中,轻轻地摇晃混合。最后,加入福尔马林的培养物在37℃下培养。此外,在孵育后6、12、24和48小时检查无菌性。

2.8.无菌试验

无菌试验证实细菌灭活均匀、完全。从添加福尔马林的收获中收集20毫升在无菌玻璃瓶中。将整个环划到2个XLD板上,在37°C下孵育。分别在24、36和72小时后检测培养皿的细菌生长情况。

2.9.佐剂制备和混合

将100克硫酸铝钾稀释在一升蒸馏水中制备硫酸铝钾溶液(10%)。将这种佐剂添加到一个桶中,储存72小时。以1升佐剂加到10升收获物的速度。

2.10.灭活产品的灌装和标签

这些产品都标有各自的名称和标签沙门氏菌enteriditis噬菌体类型。V1、V3A、V6A、V7和V35代表灭活的福尔马林沙门氏菌enteriditis噬菌体类型1、3A、6A、7和35。无菌塑料瓶内装满福尔马林灭活菌,盖上盖子,4-8°C保存,用于进一步测定5种不同灭活菌的安全性和有效性沙门氏菌enteriditis噬菌体类型,即V1、V3A、V6A、V7和V35。在SPF鸡中测定灭活菌的安全性和有效性。

2.11.灭活产品安全性和有效性的测定

的formalin-inactivated沙门氏菌enteriditis将V1、V3A、V6A、V7和V35噬菌体以0.20 mL灭活剂量皮下接种于SPF鸡颈部背侧部位沙门氏菌enteriditis噬菌体类型。其他1010制备cfu/mL攻毒接种剂沙门氏菌enteriditis噬菌体6A型。攻毒组SPF鸡口服0.20 mL。

2.12.实验设计

试验使用了124只刚孵出的SPF鸡。抵达后处死4只鸡,以确定SPF值。采集体重、血液样本和粪便拭子。用于分离的样品沙门氏菌收集组织病理切片。其余鸡分为6组,每组20只。分别为CV1、CV3A、CV6A、CV7、CV35和CV0组,分别代表接种灭活疫苗的鸡沙门氏菌enteriditis1、3A、6A、7、35型噬菌体和1组未接种的鸡作为对照。

鸡被皮下接种灭活疫苗沙门氏菌enteriditis在0.20 mL/鸡(1010cfu /毫升)。每组被关在一个单独的笼子里。给鸡提供不含抗生素的饲料和水。在接种后第14天(pi)进行取样,然后再用沙门氏菌enteriditis噬菌体6A型(UPM-0527)。每组取4只鸡称体重。献祭前,采集泄殖腔拭子和血液样本。进行大体病变检查,并从所有鸡中采集样本进行分离沙门氏菌和组织病理学。分离血清样品,保存于- 20℃,用于ELISA检测。

每组其余16只鸡中,每组8只鸡在第14天分拆到一个新房间进行口服灌胃,灌胃剂量为0.20 mL/只(1010cfu /毫升)沙门氏菌enteriditis噬菌体类型6A (UPM-0527),命名为CV1C、cvv3ac、CV6AC、CV7C、CV35C和CV0C。换句话说,CV1C、CV3AC、CV6AC、CV7C和CV35C组分别代表接种了灭活产品(V1、V3A、V6A、V7和V35)并被挑战的鸡沙门氏菌enteriditis噬菌体6A型,而CV0C代表未接种但受感染的对照鸡沙门氏菌enteriditis噬菌体6A型。攻毒后,每组cv1c、cvv3ac、CV6AC、CV7C、cv35c分别饲养在单独的笼子中,提供无抗生素饲料和水。在攻毒后(pc)第7和14天,分别从cvv1、CV3A、CV6A、CV7、CV35和CV0组和CV1C、cvv3ac、CV6AC、CV7C、CV35C和CV0C组中牺牲4只鸡进行采样。所有鸡均在泄殖腔拭子后称量体重,并采集血液。用于分离的样品沙门氏菌收集所有鸡的组织病理学标本1).


接种灭活硒PTs 接种组的描述 不。在圆周率日献祭的鸡
D0 D14 D21 D28

CV1 灭活SE PT1 接种了疫苗,没有挑战 - - - - - - 4 4 4
CV1C 灭活SE PT1 接种和挑战 - - - - - - - - - - - - 4 4
CV3A 灭活SE PT3A 接种了疫苗,没有挑战 - - - - - - 4 4 4
CV3AC 灭活SE PT3A 接种和挑战 - - - - - - - - - - - - 4 4
CV6A 灭活SE PT6A 接种了疫苗,没有挑战 - - - - - - 4 4 4
CV6AC 灭活SE PT6A 接种和挑战 - - - - - - - - - - - - 4 4
CV7 灭活的SE PT7 接种了疫苗,没有挑战 - - - - - - 4 4 4
CV7C 灭活的SE PT7 接种和挑战 - - - - - - - - - - - - 4 4
CV35 灭活的SE PT35 接种了疫苗,没有挑战 - - - - - - 4 4 4
CV35C 灭活的SE PT35 接种和挑战 - - - - - - - - - - - - 4 4
CV0 控制 接种了疫苗,没有挑战 4 4 4 4
CV0C 控制 未接种和挑战 - - - - - - - - - - - - 4 4

Se pt =沙门氏菌enteriditis噬菌体类型。在1日龄时接种SE PTs,接种后第14天进行攻毒。
2.13.隔离沙门氏菌

采集鸡的中肠内容物、盲肠内容物、泄殖腔拭子、血液、肝脏和脾脏样本进行分离和鉴定沙门氏菌6].

2.14.组织病理学

收集回肠、盲肠、法氏囊、肝脏和脾脏样本,并在10%缓冲福尔马林中固定。组织按照HE染色标准技术处理[7].

2.15.酶联免疫吸附试验(ELISA)

ELISA技术根据英国Biocheck家禽免疫测定SE抗体检测试剂盒推荐的方案采集血清。

2.16.统计分析

使用IBM SPSS Statistics 25软件对数据进行单因素方差分析(ANOVA)和Tukey诚实显著性差异(HSD)两两多重比较,以确定对体重增加的显著性[8].采用Pearson卡方检验分析不同组织的细菌分离数据。采用重复测量的单因素方差分析(One-way ANOVA)分析不同组间的细菌分离数据,并分析显微病变评分。然而,就组织损伤的严重程度而言,t -应用了测试技术。

3.结果

3.1.生长曲线

发酵过程中每2小时计数细菌生长。结果表明,在整个发酵过程中,细菌增殖良好。在不同的生长速度上有差异沙门氏菌enteriditis发酵后2、4、6、8、10、12、14、16、18、20小时的噬菌体类型。

3.2.福尔马林灭活细菌的百分比

浓度在0.5%及以上的福尔马林能够完全灭活细菌。在培养6、12、24、36和48小时时未观察到生长。然而,当福尔马林浓度为0.3和0.4%时,细菌在培养物中生长明显。

3.3.灭活剂接种后的临床症状、死亡病例及对其的挑战沙门氏菌enteriditis噬菌体6A型

对照组:CV0组在整个实验过程中均未观察到异常临床体征和死亡病例。CV0C组从攻毒后第2天(pc)至实验结束观察抑郁、厌食、羽毛皱和腹泻。第三天一只鸡死了。

无攻毒组和有攻毒组:CV1、CV3A、CV6A、CV7、CV35组在整个实验过程中均未观察到异常临床体征和死亡病例。

CV1C组在第1天和第2天出现抑郁。未观察到死亡病例。CV3AC组鸡在12小时时处于抑郁状态。然后,鸡在24小时恢复。直到实验结束均未观察到异常迹象。CV6AC组未出现异常临床体征。然而,只有一只鸡抑郁和站在一旁6小时。未观察到死亡病例。CV7C组在第1天和第2天出现抑郁和厌食。在第3天观察到羽毛褶皱。 In the group CV35C, depression and anorexia were observed on day 1 pc. Ruffled feathers were observed on day 3 pc till the end of the experiment. Mortality cases were not reported.

3.4.体重

对照组体重:CV0组在整个实验过程中,体重持续增加。第0天和第14天分别为35.00±2.10 g和124.00±4.80 g,第7天和第14天分别为201.40±4.60 g和325.00±5.70 g。第7天和第14天与CV0C组比较无显著差异。CV0C组第7天和第14天体重分别为195.00±3.60和329.00±2.70 g。

无攻毒组和有攻毒组体重:CV1组0天和14天体重分别为35.00±2.10 g和317.40±5.00 g,第7天和14天体重分别为205.00±5.20 g和327.50±4.00 g。第7天和第14天与CV1C组比较无明显差异。CV1C组第7天和第14天体重分别为202.00±3.90 g和317.40±5.00 g。

CV3A组0天和14天体重分别为35.00±2.10 g和122.50±1.80 g,第7天和14天体重分别为201.30±2.30 g和324.30±3.40 g。与CV3AC组比较,差异无统计学意义。CV3AC组在第7天和第14天体重分别为203.80±2.50 g和319.30±6.70 g。

CV6A组0天和14天体重分别为35.00±2.10 g和127.00±2.50 g,第7天和14天体重分别为199.60±3.40 g和324.00±2.40 g。与CV6AC相比,无显著差异。CV6AC组第7天和第14天体重分别为201.00±2.10 g和320.00±9.10 g。

CV7组0天和14天体重分别为35.00±2.10 g和127.50±4.40 g,第7天和14天体重分别为207.00±3.00 g和325.30±6.80 g。与CV7C相比,无显著差异。CV7C组第7天和第14天体重分别为200.40±8.10 g和324.30±7.90 g。

CV35组0天和14天体重分别为35.00±2.10 g和124.50±2.70 g, 7天和14天体重分别为206.30±3.50 g和322.50±7.20 g。与CV35C相比,无显著差异。CV35C组第7天和第14天体重分别为199.00±6.50 g和304.03±7.90 g。

3.5.隔离沙门氏菌

隔离沙门氏菌对照:在CV0组中,沙门氏菌并不是从整个实验中收集的所有样本中分离出来的。沙门氏菌是否在接种前从所有鸡中分离沙门氏菌enteriditis(天0)。

在ccv0c群中,沙门氏菌从所有样本中分离出来,但百分比不同。这些百分比分别是25%、50%或75%1-2).

隔离沙门氏菌从接种灭活疫苗的鸡身上沙门氏菌enteriditis噬菌体1型无挑战和有挑战:在CV1组,沙门氏菌并不是从整个实验中收集的所有样本中分离出来的。在CV1C组中,它从不同的样本中分离出来,有一些变异(25%或50%)。然而,在第7天和第14天也没有从血液和脾脏中分离出病毒,在第14天也没有从肝脏中分离出病毒(图1-2).

隔离沙门氏菌从接种灭活疫苗的鸡身上沙门氏菌enteriditis无挑战的噬菌体3A型和有挑战的鸡:在CV3A组中,沙门氏菌并不是从整个实验中收集的所有样本中分离出来的。在CV3AC组中,沙门氏菌在第7天和第14天从中肠内容物和第14天从盲肠内容物分离出25%的比例。在其他组织中,它在整个实验过程中都没有被分离出来1-2).

隔离沙门氏菌从接种灭活疫苗的鸡身上沙门氏菌enteriditis噬菌体6A型无挑战和有挑战的鸡:在CV6A组,沙门氏菌并不是从整个实验中收集的所有样本中分离出来的。在CV6AC组中,第7天从中肠内容物分离出25%的细菌,第7天和第14天从盲肠内容物分离出25%的细菌。在其他组织中,它在整个实验过程中都没有被分离出来1-2).

隔离沙门氏菌从接种灭活疫苗的鸡身上沙门氏菌enteriditis噬菌体7型无挑战和有挑战的鸡:在CV7组,沙门氏菌并不是从整个实验中收集的所有样本中分离出来的。在CV7C组中,第7天和第14天从中肠内容物和肝脏分离的百分比为25%,第7天从盲肠内容物分离的百分比为25%。然而,在其他组织中,它并没有在整个实验过程中被分离出来1-2).

隔离沙门氏菌从接种灭活疫苗的鸡身上沙门氏菌enteriditis噬菌体35型无挑战和有挑战的鸡:在CV35组,沙门氏菌并不是从整个实验中收集的所有样本中分离出来的。在CV35C组中,第7天和第14天从中肠、盲肠内容物中分离出25%的病毒,第7天从泄殖腔拭子、肝脏和脾脏中分离出病毒,而没有从其他组织中分离出病毒(见图)1-2).

3.6.分离的统计分析沙门氏菌从不同组织的鸡接种灭活产品和挑战

应用卡方关联技术来确定某一组织与孤立性之间是否存在相关性沙门氏菌第7天和第14天。结果发现,不同组织与分离度之间无显著相关性沙门氏菌在第7天和第14天(表23.).


价值 自由度 渐近显著性(双侧)

皮尔逊卡方的 21.143 15 0.13
似然比 28.103 15 0.92
有效病例数 36

皮尔逊卡方的那一行解释了value = 21.14和p= 0.13。这意味着组织和。之间没有统计学上的显著联系沙门氏菌第7天隔离。

价值 渐近显著性(双面)

皮尔逊卡方的 19.36 0.20
似然比 22.24 0.10
有效病例数 36

皮尔逊卡方的那一行解释了值= 19.36和p= 0.20。这意味着组织和分离之间没有显著的联系沙门氏菌第14天。
3.7.分离的统计分析沙门氏菌从接种灭活产品和挑战的不同组鸡在第7天

隔离的值沙门氏菌ccv0c组在第7天计算pc,计算方法为加中肠内容物分离值、泄殖腔交换分离值、血分离值、肝分离值和脾分离值。然后,得到均数±标准差和标准误差。同样的技术应用于CV1C, CV3AC, CV6AC, CV7C和CV35C组,应用单向重复测量方差分析(表45).最终,手段的差异进行了隔离沙门氏菌在个体组之间得到。意义(p仅当CV0C(对照组)与其他各组之间存在差异时,才观察到< 0.05)6).


集团 Midintestinal内容 盲肠的内容 泄殖腔拭子 平均值±标准差。偏差

CV0C 0.75 0.50 0.75 0.50 0.50 0.50 0.58±0.13
CV1C 0.50 0.25 0.25 0.00 0.25 0.00 0.21±0.19
C3AC 0.25 0.25 0.00 0.00 0.00 0.00 0.08±0.13
C6AC 0.25 0.25 0.00 0.00 0.00 0.00 0.08±0.13
CV7C 0.25 0.25 0.00 0.00 0.25 0.00 0.13±0.14
C35C 0.25 0.25 0.25 0.00 0.25 0.25 0.21±0.10

std代表标准。

的意思是 Std.错误 95%置信区间
下界 上界

CV0C 0.58 0.05 0.45 0.72
CV1C 0.21 0.08 0.01 0.401
CV3AC 0.08 0.05 −0.05 0.22
CV6AC 0.08 0.05 −0.05 0.22
CV7C 0.13 0.06 −0.02 0.27
CV35C 0.21 0.04 0.10 0.32

std代表标准。

(我)组 (J)组 平均差(I-J) Std.错误 团体。 差值的95%置信区间
下界 上界

CV0C CV1C 0.38∗ 0.06 0.02 0.08 0.67
C3AC 0.50∗ 0.07 0.01 0.16 0.84
C6AC 0.50∗ 0.07 0.01 0.16 0.84
CV7C 0.46∗ 0.08 0.03 0.06 0.86
C35C 0.38∗ 0.06 0.02 0.08 0.67
CV1C CV0C −0.38∗ 0.06 0.02 −0.67 −0.08
C3AC 0.13 0.06 1.00 −0.17 0.41
C6AC 0.13 0.06 1.00 −0.17 0.41
CV7C 0.08 0.05 1.00 −0.19 0.36
C35C 0.00 0.07 1.00 −0.34 0.34
CV3AC CV0C −0.50∗ 0.07 0.01 −0.84 −0.16
CV1C −0.13 0.06 1.00 −0.42 0.17
C6AC 0.00 0.00 0.00 0.00
CV7C −0.04 0.04 1.00 −0.26 0.18
C35C −0.13 0.06 1.00 −0.42 0.17
CV6AC CV0C −0.50∗ 0.07 0.01 −0.84 −0.16
CV1C −0.13 0.06 1.00 −0.42 0.17
C3AC 0.00 0.00 0.00 0.00
CV7C −0.04 0.04 1.00 −0.26 0.18
C35C −0.13 0.06 1.00 −0.42 0.17
CV7C CV0C −0.46∗ 0.08 0.03 −0.86 −0.06
CV1C −0.08 0.05 1.00 −0.36 0.19
C3AC 0.04 0.04 1.00 −0.18 0.26
C6AC 0.04 0.04 1.00 −0.18 0.26
C35C −0.08 0.05 1.00 −0.36 0.19
CV35C CV0C −0.38∗ 0.06 0.02 −0.67 −0.08
CV1C 0.00 0.07 1.00 −0.34 0.34
C3AC 0.13 0.06 1.00 −0.17 0.42
C6AC 0.13 0.06 1.00 −0.17 0.42
CV7C 0.08 0.05 1.00 −0.19 0.36

* *代表意义(p< 0.05)。Sig.代表意义。
3.8.分离的统计分析沙门氏菌分别于第14天接种灭活产品并进行挑战的不同组鸡

整体值为隔离值沙门氏菌ccv0c组在第14天计算pc,计算方法为分别计算中肠内容物分离值、泄殖腔交换分离值、血中分离值、肝中分离值、脾中分离值。然后,得到均数±标准差和标准误差。同样的技术应用于CV1C, CV3AC, CV6AC, CV7C和CV35C组,通过应用单向重复测量方差分析(表78).最终,手段的差异进行了隔离沙门氏菌在个体组之间得到。意义(p仅当CV0C(对照组)与其他各组之间存在差异时,才观察到< 0.05)9).


Midintestinal内容 盲肠的内容 泄殖腔拭子 平均值±标准差。偏差

CV0C 0.75 0.5 0.5 0.5 0.25 0.5 0.50±0.16
CV1C 0.5 0.25 0.5 0 0 0 0.21±0.25
C3AC 0.25 0 0 0 0 0 0.04±0.10
C6AC 0 0.25 0 0 0 0 0.04±0.10
CV7C 0.25 0 0 0 0.25 0 0.08±0.13
C35C 0.25 0.25 0 0 0 0 0.08±0.13

std代表标准。

的意思是 Std.错误 95%置信区间
下界 上界

CV0C 0.50 0.07 0.33 0.67
CV1C 0.21 0.10 −0.05 0.47
CV3AC 0.04 0.04 −0.07 0.15
CV6AC 0.04 0.04 −0.07 0.15
CV7C 0.08 0.05 −0.05 0.22
CV35C 0.08 0.05 −0.05 0.22

std代表标准。

(我)组 (J)组 平均差(I-J) Std.错误 团体。 差值的95%置信区间
下界 上界

CV0C CV1C 0.29 0.08 0.19 −0.11 0.70
C3AC 0.46∗ 0.04 0.00 0.24 0.68
C6AC 0.46∗ 0.08 0.03 0.06 0.86
CV7C 0.42 0.08 0.06 −0.02 0.85
C35C 0.42∗ 0.05 0.01 0.14 0.69
CV1C CV0C −0.29 0.08 0.19 −0.70 0.11
C3AC 0.17 0.08 1.00 −0.27 0.60
C6AC 0.17 0.11 1.00 −0.39 0.72
CV7C 0.13 0.11 1.00 −0.44 0.69
C35C 0.13 0.09 1.00 −0.32 0.57
CV3AC CV0C −0.46∗ 0.04 0.00 −0.68 −0.24
CV1C −0.17 0.08 1.00 −0.60 0.27
C6AC 0.00 0.07 1.00 0.34 0.34
CV7C −0.04 0.04 1.00 −0.26 0.18
C35C −0.04 0.04 1.00 −0.26 0.18
CV6AC CV0C −0.46∗ 0.08 0.03 −0.86 −0.06
CV1C −0.17 0.11 1.00 −0.72 0.39
C3AC 0.00 0.07 1.00 −0.34 0.34
CV7C −0.04 0.08 1.00 −0.45 0.36
C35C −0.04 0.04 1.00 −0.26 0.18
CV7C CV0C −0.42 0.42 0.06 −0.85 0.02
CV1C −0.13 0.13 1.00 −0.69 0.44
C3AC 0.04 0.04 1.00 −0.18 0.26
C6AC 0.04 0.04 1.00 −0.36 0.45
C35C 0.00 0.05 1.00 −0.34 0.34
CV35C CV0C −0.42∗ 0.06 0.01 −0.69 −0.14
CV1C 0.13 0.07 1.00 −0.57 0.32
C3AC 0.04 0.06 1.00 −0.18 0.26
C6AC 0.04 0.06 1.00 −0.18 0.26
CV7C 0.00 0.05 1.00 −0.34 0.34

显示的意义(p< 0.05)。Sig.代表意义。
3.9.严重损伤

对照组的大体病变:CV0组在整个实验过程中均未观察到大体病变。

CV0C组除1只鸡在饲养后第14天出现法氏囊肿大外,1只鸡在饲养后第3天出现法氏囊和肝脏肿大外,未见明显病变。

接种不同灭活产品不攻毒和不同灭活产品和攻毒的鸡的大体病变:CV1组和CV1C组在整个实验过程中均未观察到大体病变。CV3A组和CV3AC组在整个实验过程中未观察到明显病变。CV6A组和CV6AC组在整个实验过程中均未观察到明显病变。CV7组和CV7C组在整个实验过程中未观察到明显病变。CV35组和CV35C组在整个实验过程中未观察到大体病变。

3.10.回肠显微病变

对照组回肠显微病变:CV0组在整个实验过程中均未检测到显微病变(评分为00±00)(图)3.-4).CV0C组在第7天检测到轻度异亲性浸润和充血(评分0.20±0.20),第14天检测到轻度至中度异亲性浸润和充血(评分0.40±0.20)(图)3.-4).

不同灭活剂无攻毒接种组回肠显微病变和不同灭活剂及攻毒接种组回肠显微病变:CV1组在整个实验过程中均未检测到病变(评分为00±00)。CV1C组在第7天和第14天检测到轻度到中度异嗜性浸润和充血。评分分别为0.20±0.20和0.40±0.20,分别记录在第7天和第14天3.-4).

CV3A组、cvv3ac组、CV6A组、CV6AC组、CV7组、CV7C组、CV35组在整个实验过程中均未检测到病变。记录0.00±0.00评分。而CV35C组在第7天和第14天检测到轻度异嗜性浸润和充血。评分分别为0.20±0.20和0.40±0.20,分别记录在第7天和第14天3.-4).

3.11.盲肠显微病变

对照组盲肠显微病变:CV0组在整个实验过程中未发现任何显微病变(评分为00±00)。CV0C组在第7天和第14天检测到轻度异嗜性浸润和充血(评分0.20±0.20)(图)3.-4).

不同灭活产品无攻毒接种组和不同灭活产品及攻毒接种组盲肠显微病变:CV1组、CV3A组、CV3AC组、CV6A组、CV6AC组、CV7组、CV35组在整个实验过程中均未检测到病变。记录0.00±0.00评分。然而,CV1C组、CV7C组和CV35C组在第7天和第14天检测到轻度异嗜性浸润和充血。评分分别为0.20±0.20和0.40±0.20,分别记录在第7天和第14天3.-4).

3.12.法氏囊显微病变

对照组法氏囊显微病变:CV0组在整个实验过程中未发现任何显微病变(评分为00±00)。在CV0C组,在第7天和第14天检测到轻度到中度异嗜性浸润、充血和坏死。评分分别为0.20±0.20和0.40±0.20,分别记录在第7天和第14天3.-4).

不同灭活产品无攻毒接种组和不同灭活产品及攻毒接种组的法氏囊显微病变:在CV1组、CV3A组、CV6A组、CV6AC组、CV7组和CV35组中,整个实验均未检测到病变。评分为0.00±0.00,在CV1C组、cvv3ac组、CV7C组和CV35C组中,在第7天和第14天检测到轻度到中度异嗜性浸润、充血和坏死。第7天和第14天分别记录0.20±0.20和0.40±0.20评分。然而,CV7C无坏死(图3.-4).

3.13.肝脏显微病变

对照组肝脏显微病变:CV0组在整个实验过程中均未检测到显微病变(评分为00±00)。CV0C组在第7天出现轻度异嗜性浸润和充血。在第14天检测到中度异亲性浸润和充血。评分分别为0.20±0.20和0.40±0.20,分别记录在第7天和第14天3.-4).

不同灭活产品无攻毒接种和不同灭活产品及攻毒接种鸡肝脏显微病变:CV1组、CV3A组、CV3AC组、CV6A组、CV6AC组、CV7组、CV7C组、CV35组在整个实验过程中均未检测到病变。评分为0.00±0.00,而在CV1C组和CV35C组中,在第7天和第14天检测到轻度到中度异嗜性浸润和充血。评分分别为0.20±0.20和0.40±0.20,分别记录在第7天和第14天3.-4).

3.14.脾脏镜下病变

对照组脾脏显微病变:CV0组在整个实验过程中均未检测到显微病变(评分为00±00)。CV0C组在第7天出现轻度异嗜性浸润和充血。在第14天检测到轻度到中度异亲性浸润和充血。评分分别为0.20±0.20和0.40±0.20,分别记录在第7天和第14天3.-4).

不同灭活产品无攻毒接种组和不同灭活产品及攻毒接种组的脾脏显微病变:CV1组、CV3A组、CV3AC组、CV6A组、CV6AC组、CV7组、CV7C组、CV35组在整个实验过程中均未检测到病变。评分为0.00±0.00,而在CV1C组和CV35C组中,在第7天和第14天检测到轻度到中度异嗜性浸润和充血。评分分别为0.20±0.20和0.40±0.20,分别记录在第7天和第14天3.-4).

3.15.所致病变评分的统计分析沙门氏菌在接种灭活产品的鸡不同组织和挑战第7天

在第7天,几乎所有组织均以不同评分检测到异嗜性浸润(轻至中度)和充血。将CV0C组回肠病变评分与CV1C组回肠相同病变评分、CV3AC组回肠相同病变评分、CV6AC组回肠相同病变评分、CV7C组回肠相同病变评分、CV35C组回肠相同病变评分叠加。采用重复测量的单因素方差分析。计算平均值、标准差和标准误差。同样的技术应用于盲肠、法氏囊、肝脏和脾脏的病变。结果发现,不同组织的平均值之间比较无显著性差异(表10- - - - - -12).然而,坏死没有牵连,因为它只在法布氏囊被检测到。


组织 的意思是 标准偏差 N

回肠 0.10 0.11 6
盲肠 0.13 0.10 6
法氏囊 0.17 0.08 6
0.10 0.11 6
0.10 0.11 6

N表示组数(CV0C、CV1C、cvv3ac、CV6AC、CV7C、CV35C)。

组织 的意思是 标准错误 95%置信区间 N
下界 上界

回肠 0.10 0.05 −0.02 0.22 6
盲肠 0.13 0.04 0.03 0.24 6
法氏囊 0.17 0.03 0.08 0.25 6
0.10 0.05 −0.02 0.22 6
0.10 0.05 −0.02 0.22 6

N代表接种了挑战的群体数量。

(我)组织 (J)组织 平均差(I−J) Std.错误 团体。 差值的95%置信区间
下界 上界

回肠 盲肠 −0.03 0.03 1.00 −0.19 0.13
−0.07 0.04 1.00 −0.27 0.14
0.00 0.00 0.00 0.00
0.00 0.00 0.00 0.00
盲肠 回肠 0.03 0.03 1.00 −0.13 0.19
−0.03 0.03 1.00 −0.19 0.13
0.03 0.03 1.00 −0.13 0.19
0.03 0.03 1.00 −0.13 0.19
回肠 0.07 0.04 1.00 −0.14 0.27
盲肠 0.03 0.03 1.00 −0.13 0.19
0.07 0.04 1.00 −0.14 0.27
0.07 0.04 1.00 −0.14 0.27
回肠 0.00 0.00 0.00 0.00
盲肠 −0.03 0.03 1.00 −0.19 0.13
−0.07 0.04 1.00 −0.27 0.14
0.00 0.00 0.00 0.00
回肠 0.00 0.00 0.00 0.00
盲肠 −0.03 0.03 1.00 −0.19 0.13
−0.07 0.04 1.00 −0.27 0.14
0.00 0.00 0.00 0.00

Sig.代表意义。std代表标准。
3.16.所致病变评分的统计分析沙门氏菌在接种灭活产品和挑战第14天的鸡不同组织中

在第14天,几乎所有组织都检测到异嗜性浸润(轻度到中度)和充血,评分不同。将CV0C组回肠病变评分与CV1C组回肠相同病变评分相加,与CV3AC组回肠相同病变评分相加,与CV6AC组回肠相同病变评分相加,与CV7C组回肠相同病变评分相加,与CV35C组回肠相同病变评分相加。采用重复测量的单因素方差分析。计算平均值、标准差和标准误差。同样的技术应用于盲肠、法氏囊、肝脏和脾脏的病变。结果发现,不同组织之间的平均值之间没有显著差异(表13- - - - - -15).


组织 的意思是 标准偏差 N

回肠 0.20 0.22 6
盲肠 0.23 0.20 6
法氏囊 0.33 0.16 6
0.20 0.22 6
0.20 0.22 6

N表示组数(CV0C、CV1C、cvv3ac、CV6AC、CV7C、CV35C)。

组织 的意思是 标准错误 95%置信区间 N
下界 上界

回肠 0.20 0.09 −0.03 0.43 6
盲肠 0.23 0.08 0.03 0.44 6
法氏囊 0.33 0.07 0.16 0.51 6
0.20 0.09 −0.03 0.43 6
0.20 0.09 −0.03 0.43 6

N表示组数(CV0C、CV1C、cvv3ac、CV6AC、CV7C、CV35C)。

(我)组织 (J)组织 平均差(I−J) Std.错误 团体。 差值的95%置信区间
下界 上界

回肠 盲肠 −0.03 0.08 1.00 −0.42 0.35
−0.13 0.08 1.00 −0.54 0.27
0.00 0.00 0.00 0.00
0.00 0.00 0.00 0.00
盲肠 回肠 0.03 0.08 1.00 −0.35 0.42
−0.10 0.07 1.00 −0.43 0.27
0.03 0.08 1.00 −0.35 0.42
0.03 0.08 1.00 −0.35 0.42
回肠 0.13 0.08 1.00 −0.27 0.54
盲肠 0.10 0.07 1.00 −0.23 0.43
0.13 0.08 1.00 −0.27 0.54
0.13 0.08 1.00 −0.27 0.54
回肠 0.00 0.00 0.00 0.00
盲肠 −0.03 0.08 1.00 −0.42 0.35
−0.13 0.08 1.00 −0.54 0.27
0.00 0.00 0.00 0.00
回肠 0.00 0.00 0.00 0.00
盲肠 −0.03 0.08 1.00 −0.42 0.35
−0.13 0.08 1.00 −0.54 0.27
0.00 0.00 0.00 0.00

std代表标准。Sig.代表意义。
3.17.对照第7天和第14天的损伤程度沙门氏菌在不同组织接种灭活产品和挑战

计算CV0C组在第7天不同组织(回肠、盲肠、法氏囊、肝脏和脾脏)的异嗜性浸润和充血的总评分总和。然后计算CV1C、CV3AC、CV6AC、CV7C和CV35C组对同一病变的综合评分总和。接下来,在第7天对所有组的病变进行评分。

该技术应用于所有组相同病变于第14天。最终,在第7天和第14天得到病变评分的均值、标准差和标准差,并通过配对样本的应用进行比较t以及。然而,第7天和第14天的病变评分方法没有显著差异(表1617).


的意思是 N Std.偏差 误差平均值

第7天pc 0.19 29 0.36 0.07
第14天pc 0.24 29 0.20 0.04

N表示组织的数量。std代表标准。

成对的差异 t df Sig (2-tailed)。
的意思是 Std.偏差 误差平均值 差值的95%置信区间
较低的

第7天每天-第14天每天 −0.06 0.33 0.06 −.018 0.07 −0.89 28 0.38

Df代表自由度。t代表t价值。Sig.代表显著性水平。

意思是效价 格林尼治时间 CV % 意思是效价 格林尼治时间 CV % 意思是效价 格林尼治时间 CV %
2周 3周 4周

CV0 2 2 85 14 11 85 8 6 78
CV1 2 2 150 17 13 64 14 7 94
CV3A 11 4 158 67 35 143 17 10 114
CV6A 12 8 59 24 24 28 15 8 103
CV7 16 15 53 10 4 113 10 6 99
CV35 14 13 51 28 27 28 22 17 76
CV0C - - - - - - - - - - - - - - - - - - 165 103 68 16 14 64
CV1C - - - - - - - - - - - - - - - - - - 28 27 35 38 19 71
CV3AC - - - - - - - - - - - - - - - - - - 18 16 48 1359 380 108
CV6AC - - - - - - - - - - - - - - - - - - 21 17 89 44 43 133
CV7C - - - - - - - - - - - - - - - - - - 10 5 109 18 14 78
CV35C - - - - - - - - - - - - - - - - - - 8 7 63 85 50 110

3.18.ELISA

ELISA在检测沙门氏菌enteriditis对照组:CV0组和CV0C组,沙门氏菌enteriditis在整个实验过程中未测定抗体18).

ELISA在检测沙门氏菌enteriditis在接种不同灭活产品而不攻毒的鸡和接种不同灭活产品和攻毒的鸡中:在CV1组、CV1C组、CV3A组、CV6A组、CV6AC组、CV7组、CV7C组、CV35组和CV35C组,沙门氏菌enteriditis在整个实验过程中未测定抗体18).而CV3AC组在第14天平均抗体滴度为135918).

4.讨论

研究表明,不同的灭活沙门氏菌enteriditis噬菌体类型可以提供不同程度的预防;换句话说,灭活产物具有缓解实验的潜力沙门氏菌enteriditisSPF鸡噬菌体6A型感染。观察到不同灭活沙门氏菌enteriditis噬菌体类型可以减少沙门氏菌enteriditis在宿主中,却不能消灭有机体[9].研究的总体结果表明,两者都失活沙门氏菌enteriditis噬菌体类型3A和6A是安全有效的,可能有助于缓解沙门氏菌enteriditis家禽噬菌体6A型感染。

接种不同灭活剂沙门氏菌enteriditis与对照组相比,噬菌体类型减轻了临床症状。所有接种攻毒组(CV1C、cvv3ac、CV6AC、CV7C和CV35C)的临床症状均较未接种和攻毒对照组(CV0C)轻微。在不同噬菌体类型的微生物之间缓解的挑战的临床图像的变化,意味着它们在控制的相对有效性的变化沙门氏菌enteriditis噬菌体6A型感染。不同灭活疫苗接种组间临床体征的变化沙门氏菌enteriditis噬菌体类型是可以理解的,因为不同的噬菌体毒力不同沙门氏菌enteriditis噬菌体类型[10,因此具有免疫原性。

CV0C组出现抑郁、厌食、羽毛皱折、腹泻等症状沙门氏菌enteriditis6A型噬菌体可引起SPF鸡的临床疾病。此外,从挑战组接种的临床体征可以明显看出,在疾病控制中存在交叉保护作用。灭活沙门氏菌enteriditis3A和6A型噬菌体在控制临床症状方面最有效,其次是沙门氏菌enteriditis噬菌体类型1,7和35。市售灭活疫苗沙门氏菌enteriditis与对照组相比,有相似的缓解临床症状的潜力。然而,Huberman等人[11报告称,在接种了AviPro®疫苗的鸡中,没有出现抑郁或疾病的临床症状沙门氏菌(活的商业稀释肠炎沙门氏菌Sm24/Rif12/Ssq)疫苗,三价灭活肉鸡疫苗沙门氏菌疫苗提供了安全有效的减少肠道定植和器官入侵的相关血清沙门氏菌血清后的挑战。随后,它可用于控制计划,以降低家禽群和产品的污染率[12,所以失活沙门氏菌enteriditis噬菌体类型(尤其是3A和6A)可有效控制沙门氏菌enteriditis在马来西亚的感染。在对照组CV0C中存在死亡率,在接种组和挑战组中没有死亡率,证明灭活沙门氏菌enteriditis噬菌体类型可有效控制特异性无病原鸡的死亡率。第7天和第14天,CV0C组的体重较CV0组分别下降0.7%和2.8%。它表明沙门氏菌enteriditis挑战对体重增加产生了负面影响。

然而,鸡的挑战沙门氏菌enteriditis6A型噬菌体接种后不同灭活沙门氏菌enteriditis噬菌体类型比受试对照组获得更好的体重。它被发现失活沙门氏菌enteriditis与CV0C相比,3A和6A型噬菌体分别在第21天和28天在控制体重增加的不良作用方面更有效。然而,El-Shall等人[13报道,使用直播沙门氏菌enteriditis疫苗有很强的预防作用沙门氏菌enteriditis挑战特别是生长表现,包括体重增加,这支持灭活的建议沙门氏菌enteriditis噬菌体类型3A和6A的控制沙门氏菌enteriditis在马来西亚的感染。

控制策略的一个主要问题是沙门氏菌enteriditis是细菌在不同器官如输卵管、卵巢、肝脏、脾脏、肠道、盲肠等的定植,以及由此产生的粪便脱落[12].的沙门氏菌分离结果表明,灭活菌具有良好的活性沙门氏菌enteriditis噬菌体类型。沙门氏菌enteriditis从75%的粪便拭子和肠道内容物以及50%的盲肠、肝脏、脾脏和血液样本中分离出来。在第14天观察到同样的分离率,除了粪便拭子和肝脏样本仅减少了25%。它表明了…的能力沙门氏菌enteriditis噬菌体6A型即使在4周龄的鸡中也能引起全身感染。

各组接种不同灭活疫苗沙门氏菌enteriditis噬菌体类型减少器官定植和粪便脱落。但是,接种用灭活沙门氏菌enteriditis3A型和6A型噬菌体可以提供一定的保护,并显示出减少细菌定植和粪便脱落的巨大潜力。此外,这两个沙门氏菌enteriditis3A和6A型噬菌体在第7天消灭了肝脏、脾脏、血液和粪便拭子中的细菌。然而,CV3AC组和CV6AC组的1个盲肠和1个肠道内容物样本在第7天呈阳性。此外,在第7天,我们发现灭活的3A型噬菌体能够清除肠道,而沙门氏菌enteriditis6A型噬菌体在第14天清除盲肠。此外,失活者沙门氏菌enteriditis噬菌体类型1、7和35在第14天显示出一定的预防挑战的潜力。然而,在Elazomi等人的一项研究中。14,由福尔马林杀死产生的保护沙门氏菌从两者中收获在体外在活的有机体内在鸡中作为候选疫苗使用的情况在统计上不显著。

在以前的一些研究中,鸡的实验感染被报道沙门氏菌enteriditis可导致肠道定植及粪便中相关细菌脱落达数月之久[15].此外,沙门氏菌,由于其不同的serovars,能够在棚子环境中生存和坚持[9].然而,在目前的研究中,接种是灭活的沙门氏菌enteriditis在大量鸡体内,噬菌体3A和6A型不仅减少了器官定植,而且消灭了致病菌。

不同灭活的防护水平和其他结果的变化沙门氏菌enteriditis噬菌体的类型取决于佐剂的组成、菌株的种类等因素沙门氏菌enteriditis和失活法。大体病变和组织病理学改变的结果支持微生物分离的结果。它表明沙门氏菌enteriditis在器官中没有持续性。因此,它不能在不同的组织中产生大体病变。接种对照攻毒的鸡无病变可能与攻毒时的鸡龄有关。此外,未接种和攻毒的对照组鸡(CV0C)比攻毒的对照组鸡(CV1C, cvv3ac, CV6AC, CV7C和CV35C)显示组织病理学变化的组织数量更高。它代表灭活的功效沙门氏菌enteriditis本研究中的噬菌体类型。

5.结论

由此得出不同灭活的结论沙门氏菌enteriditis噬菌体类型可能部分防止鸡感染沙门氏菌enteriditis噬菌体6A型感染。它还提供了灭活的证据沙门氏菌enteriditis3A和6A型噬菌体安全有效。此外,他们的接种可能有助于高水平的预防沙门氏菌enteriditis鸡噬菌体6A型感染。

数据可用性

用于支持本研究结果的数据包含在文章中。

利益冲突

作者声明,他们与本文的作者身份或发表没有任何利益冲突。

致谢

作者感谢个人和机构直接或间接地支持完成该项目。该研究得到了马来西亚科学、技术和创新部(MOSTI)的技术基金(资助号为6363001和6364002)的支持。

参考文献

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